[发明专利]一种检测细胞内连二亚硫酸钠的荧光探针及其应用

说明书

本发明提供了一种检测连二亚硫酸钠的荧光探针，其结构式为：。本发明的偶氮衍生物的荧光探针能够与连二亚硫酸钠进行特异性反应，通过荧光信号的产生对连二亚硫酸钠进行定性检测，能够对活细胞中的连二亚硫酸钠进行实时快速检测。此外该荧光探针廉价易得，可经化学合成获得，且合成工艺简单易行，制备成本低，使用方便，能够快速检测活细胞中的连二亚硫酸钠。

技术领域

本发明涉及一种快速检测连二亚硫酸钠的荧光探针，属于有机小分子荧光探针领域。

背景技术

连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄），也称为保险粉，是一种常见的白色砂状结晶或淡黄色粉末化学用品。连二亚硫酸钠被广泛用于纺织工业的还原性染色、还原清洗、印花和脱色及用作丝、毛、尼龙等织物的漂白，且由于不含重金属，经其漂白后的织物色泽十分鲜艳，不易退色。此外，连二亚硫酸钠还可用于食品漂白，诸如明胶、蔗糖、蜜饯，及肥皂、动（植）物油、竹器、瓷土的漂白等，以及应用于有机合成，如染料、药品的生产里作还原剂或漂白剂，同时连二亚硫酸钠是最适合木浆造纸的漂白剂。连二亚硫酸钠的广泛应用导致人们在生活中随时可接触到连二亚硫酸钠。但是，连二亚硫酸钠具有较强的毒性和致癌性，对眼睛、呼吸道黏膜有刺激性。经常接触连二亚硫酸钠可引起头痛、恶心、呕吐，以及引起眼、鼻黏膜刺激症状，严重时发生喉头痉挛及水肿、支气管痉挛。大量吸入连二亚硫酸钠可引起肺水肿、窒息、昏迷，甚至死亡。慢性连二亚硫酸钠中毒表现为嗅觉迟钝、慢性鼻炎、支气管炎、肺通气功能和免疫功能下降，严重者可引起肺部弥漫性间质纤维化和中毒性肺硬变。经口摄入连二亚硫酸钠的主要毒性表现为胃肠道反应，如恶心、呕吐。此外，可影响钙的吸收，使机体钙丢失。因此，实时检测活生物体内的连二亚硫酸钠对于研究其毒性，以及连二亚硫酸钠的安全使用和预防具有重要的作用。

传统的连二亚硫酸钠检测方法包括紫外可见分光光度法、化学发光法、电化学法、色谱法等，这些方法通常会引起待测样品的损失，不适用于活生物体内连二亚硫酸钠的实时原位检测。荧光成像由于具有高灵敏度、高选择性和实时监测，为检测活生物体内的连二亚硫酸钠提供了一种可行的方法。但检索发现，有关检测活生物体内连二亚硫酸钠的荧光探针及其应用还未见报道。

发明内容

针对现有技术中缺乏检测活生物体内连二亚硫酸钠的荧光探针的问题，本发明提供一种检测活生物体内连二亚硫酸钠荧光探针；本发明还提供了上述荧光探针的制备方法和在检测活生物体中连二亚硫酸钠的用途。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种检测连二亚硫酸钠的荧光探针，其结构式为如式（I）所示：

式(I)；

其中，R为-H或-COOH；优选为-COOH。

一种上述荧光探针的合成方法，包括以下步骤：对氨基苯磺酸钠重氮化后的产物与如式（II）所示的化合物偶合：

式(II)；

其中，R为-H或-COOH；优选为-COOH。

进一步的，合成方法包括以下步骤：

（1）将对氨基苯磺酸钠溶液和亚硝酸钠溶液混合搅匀；低温搅拌下加入盐酸，生成重氮盐；

（2）低温下，将重氮盐缓慢加入到式（II）所示的化合物溶液中，然后搅拌，再缓慢升至室温，过滤，干燥后得荧光探针。

步骤（1）中，对氨基苯磺酸钠溶液的质量百分浓度为15%；对氨基苯磺酸钠、亚硝酸钠和盐酸的摩尔比为1:2.5:1.2。

步骤（1）中，盐酸的质量百分浓度为30%。

步骤（1）和（2）中，低温温度为0-5℃。