[发明专利]一种检测吡虫啉的免疫层析试纸

权利要求书

1.一种检测吡虫啉的免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫(1)、结合垫(2)、层析膜(3)及吸收垫(4)，其特征在于，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗吡虫啉单克隆抗体；所述的层析膜上设有用吡虫啉人工抗原溶液印制的隐形检测印迹(5)和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹(6)；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料；

所述的氮掺杂碳纳米材料标记的抗吡虫啉单克隆抗体的制备方法为：

(1)表面羧基化SiO₂纳米颗粒的制备

采用反相微乳法合成SiO₂纳米颗粒：按体积比10:30:10:1比例取Triton X-100、环己烷、正己醇、超纯水搅拌形成5.1mL微乳液，加入200μL氨水搅匀后，再加入80μL正硅酸乙酯，室温避光反应24h；反应结束后6000rpm离心10min，乙醇洗涤4次后用1mL乙醇复溶，形成溶液A；将0.47g氯乙酸加入到2.5mL浓度为6mol/L的NaOH溶液中，形成溶液B；将溶液A加入到溶液B中，室温搅拌反应70min；反应结束后，6000rpm离心10min，将得到的沉淀用双蒸水洗涤4次后，氮吹干燥，4℃密封保存；

(2)氮掺杂碳纳米材料SiO₂荧光探针的制备

将2mg表面羧基化的SiO₂纳米颗粒和2mg N,N'-羰基二咪唑加入到400μLN,N-二甲基甲酰胺中，室温下磁力搅拌反应3h；将其加入到1mL浓度为l mg/mL氮掺杂碳纳米材料溶液中，其中氮掺杂碳纳米材料溶解在0.1mol/LNaOH溶液中，15min加完，室温避光搅拌反应4h后；再次加入20μL正硅酸乙酯，0.12g氯乙酸，0.25mg氮掺杂碳纳米材料颗粒，室温避光搅拌反应2h进行包壳，反复包壳3次，氮吹干燥，4℃密封保存；

(3)吡虫啉单克隆抗体的标记

取步骤(2)制备的荧光探针15mg溶于1.5mL二氧六环、1.5mLN,N-二甲基甲酰胺、60μL三乙胺的混合溶液中，冰浴30min，搅拌加入20μL氯甲酸异丁酯，冰浴2h，得到标记溶液；将标记溶液滴加到500μL浓度为l mg/mL的单克隆抗体溶液中，室温搅拌反应过夜；4℃条件下，反应物用0.01mol/L、pH 7.4的PBS缓冲溶液透析3d，得到氮掺杂碳纳米材料标记的吡虫啉单克隆抗体溶液，4℃保存。

2.根据权利要求1所述的检测吡虫啉的免疫层析试纸，其特征在于，所述的支撑体包括设置在吸附层底面的底层(7)和设置在吸附层顶面的面层(8)。

3.根据权利要求1所述的检测吡虫啉的免疫层析试纸，其特征在于，所述的氮掺杂碳纳米材料是以壳聚糖为碳源，乙二胺为氮掺杂剂，采用水热法制备而成，具体方法为：将壳聚糖2.5g溶于5mL超纯水中，加入5mL乙二胺，混匀后置于高压反应釜的聚四氟乙烯内胆中，180℃反应2h，反应结束后将产物抽滤，双蒸水洗涤2次，60℃烘箱干燥得到氮掺杂碳纳米材料。