[发明专利]一种环氧氨基层析介质及其制备方法

说明书

本发明涉及一种环氧氨基层析介质，由多糖微球与氨基环氧物开环反应而成，本发明还涉及上述环氧氨基层析介质的制备方法，将多糖微球与氨基环氧物反应制得环氧氨基层析介质。本发明的环氧氨基层析介质具有较长的中间臂，蛋白结合载量高，且制备方法简单。

技术领域

本发明涉及分离纯化技术领域，具体涉及一种环氧氨基层析介质及其制备方法。

背景技术

甲氨基层析介质是一种强阴离子型层析介质，通过带正电荷的氨基与带负电荷的蛋白、病毒等生物分子吸附结合，带正电荷的杂质流穿，从而达到蛋白或病毒分离纯化目的。强阴离子层析介质常用于蛋白、病毒、多肽、核酸等多有带电的生物分子的分离纯化，应用广泛。

传统的甲氨基层析介质的制备方法是通过微球上的羟基与环氧基活化连接中间臂，甲氨基再通过氨基与中间臂键合到微球上，反应分为多步，生产成本高，制备周期长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种制备简单、合成周期短、纯化产物结合量高的环氧氨基层析介质及其制备方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种环氧氨基层析介质，由多糖微球与氨基环氧物开环反应而成，其结构如下：

R1为-(CH₂)_n，n为0或1或2或3,

R2为H或-(CH₂)_mCH₃，m为1或2，

R3为H或-(CH₂)_kCH₃或k为1或2。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

n为1或2或3。

本发明的环氧氨基层析介质的有益效果是：用本方法制备得到的环氧氨基层析介质具有较长的中间臂，降低了空间位阻效应，从而在相同配基浓度下，提高其蛋白结合载量，尤其是在大粒径环氧氨基层析介质的应用过程中，上样流速快，样品保留时间较短。

本发明还提供了制备上述环氧氨基层析介质的制备方法，将将多糖微球与氨基环氧物反应制得环氧氨基层析介质，反应方程式为：

R1为-(CH₂)_n，n为0或1或2或3,

R2为H或-(CH₂)_mCH₃，m为1或2，

R3为H或-(CH₂)_kCH₃或k为1或2。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，多糖微球与氨基环氧物的具体反应步骤为：将多糖微球加入反应瓶中，加水并搅拌，然后依次加入氨基环氧物、氢氧化钠和硼氢化钠，所述水、氨基环氧物、氢氧化钠、硼氢化钠与所述多糖微球的质量比分别为：200～1000:200～600:10～100:1～10:1000，加热至20～60℃，300～500rpm下搅拌反应16～24h得到混合物，除去上清保留沉淀并使用纯水洗涤得到环氧氨基层析介质。

进一步，所述多糖微球为琼脂糖微球、葡聚糖微球、纤维素微球中的任一种，所述多糖微球的粒径为5μm-300μm。

进一步，所述氨基环氧物为环氧乙烷-2-胺、氯化缩水甘油三甲基铵、(2,3-环氧丙基)甲基苯胺中的任一种，制得的环氧氨基层析介质结构式如下所示：