[发明专利]实施体积排阻色谱的设备和方法

说明书

本发明涉及实施体积排阻色谱的设备和方法。本发明的实施方式以在常规高效液相色谱或超高效液相色谱压力及更高压力下使用小颗粒的体积排阻色谱的设备和方法为特征。

本申请是申请日为2010年12月15日的申请号为201080061579.2的题为“实施体积排阻色谱的设备和方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求享有2009年12月15日提交的美国临时专利申请第61/286,582号和2009年6月17日提交的美国临时专利申请第61/355,970号的优先权，这两篇申请的全部公开内容通过引用结合于此。

技术领域

本发明涉及实施体积排阻色谱的设备和方法。本发明的实施方式以在常规高效液相色谱或超高效液相色谱压力及更高压力下使用小颗粒的体积排阻色谱的设备和方法为特征。

发明背景

本发明将使用如下定义的以下术语，除非出现该术语的上下文要求不同的含义。

色谱是用于浓缩或分离在混合物中发现的一种或更多种化合物的分离方法。化合物通常存在于样品中。本文使用术语“样品”广泛地代表其中一个个体需要分析的任何混合物。术语“混合物”在含有一种或更多种溶解的化合物的流体的意义上使用。流体可包含水和/或其它液体和气体。感兴趣的化合物称为被分析物。

色谱是一种差异化的迁移过程。混合物中的化合物以不同的速率经过色谱柱，导致它们的分离。这种迁移通过与被称为固定相的颗粒填冲床或多孔整体结构有关的被称为流动相的流体的传送而发生。在某些色谱模式下，差异化迁移由被分析物与固定相和流动相的亲和性的差异而发生。

体积排阻色谱(SEC)是基于水动力半径来分离或孤立混合物中的各被分析物的一类色谱。在SEC中，分离因为被分析物探测多孔性固定相介质的体积的能力不同而发生。参见例如A.M.Striegel等人，Modern Size-Exclusion Chromatography:Practice ofGelPermeation and Gel Filtration Chromatography，第二版，Wiley，NJ，2009。SEC典型地用于分离大分子或分子的复合物。例如，非限制性地，许多生物来源的大分子例如脱氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)，蛋白质、多糖、以及其片断和复合物都用SEC分析。合成多聚物、塑料等也用SEC分析。

SEC一般使用具有颗粒填充床的柱子来实施。这种颗粒的填充床是分离介质或者固定相，流动相将流经所述介质或固定相。放置柱子使其与泵和样品注射器流体相通。通过样品注射器在压力下将样品混合物加载到柱子上，混合物和流动相在泵的推动下通过柱子。混合物中的化合物离开柱子或从柱子上洗脱，最大的化合物首先离开，最小的分子最后离开。

放置柱子使其与检测器流体相通，当溶液离开柱子时，检测器能检测溶液的性质的变化。检测器将把这些变化作为图(称为色谱图)登记和记录，用于确定被分析物的存在与否。被分析物离开柱子的时间是分子的大小的指示。分子的分子量能使用标准校正曲线来估算。用于体积排阻色谱的检测器的例子是但不限于，折光率检测器、紫外检测器、光散射检测器和质谱仪。

希望具有用于SEC技术的柱子，所述柱子能在高于5000psi的压力和高流速下操作以加速分析时间。还希望具有附加的或提高的效率和分辨率；减少的溶剂使用量；改善的与先进的检测器的兼容性。希望具有带如此固定相的柱子，所述固定相具有精确定义的孔隙结构和粒径以产生可高重复的结果。最后，希望具有带如此固定相的柱子，所述固定相具有与生物大分子相容的表面修饰基团。

发明内容