[发明专利]一种识别贝伐珠单抗的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了一种识别贝伐珠单抗的单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的轻链CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO.3，轻链CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO.4，轻链CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO.5；所述单克隆抗体的重链CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO.6，重链CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO.7，重链CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO.8；本发明通过大量复杂实验筛选并验证了所述单克隆抗体能特异性结合贝伐珠单抗，同时不影响贝伐珠单抗与VEGF的结合，能够监测评估贝伐珠单抗的代谢过程，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种识别贝伐珠单抗的单克隆抗体及其应用。

背景技术

近年来，抗体药物以其安全有效、特异性高等优点被广泛应用于肿瘤、移植排异、感染性疾病、自身免疫疾病等多种疾病的临床治疗。抗体药物的药物代谢是临床前和临床试验研究中的重要检测指标。

贝伐珠单抗是一种以血管内皮生长因子(Vascular Endothelial GrowthFactor，VEGF)为特异性靶点的重组人源化IgG1型单克隆抗体，它能特异性结合VEGF，阻断VEGF与VEGF受体1和2的结合及信号传导，抑制VEGF的生物学活性，使血管生成受阻，从而无法提供肿瘤组织生长所需的氧和其他营养，发挥抗癌作用，贝伐珠单抗可用于治疗转移型结肠直肠癌、非小细胞肺癌和乳腺癌等。

由于贝伐珠单抗的靶点VEGF是可溶性蛋白，其研发机构在该药物的药物代谢(Pharmacokinetics，PK)研究中使用了一种检测血清总药物浓度的方法，该方法不区分游离的药物和与靶点VEGF结合的药物(详见贝伐珠单抗产品说明)，因此要求检测用试剂能同时识别游离的贝伐珠单抗和已与VEGF结合的贝伐珠单抗。安维汀(Avastin，基因泰克公司)说明书中关于PK检测的叙述明确表明检测血液中药物浓度时，应包括游离的药物和已结合配体的药物。而国内常用的检测手段，主要采用抗原VEGF包板检测，不能检测到已和VEGF结合的贝伐珠单抗，无法同时检测游离的药物和已结合配体的药物，因此，在临床检测中无法反映出生物样本中全部的药物含量。

综上所述，研发一种有效检测血液中贝伐珠单抗浓度的单克隆抗体，能同时检测游离药物和已结合配体的药物，在临床前和临床试验检测贝伐珠单抗的血药浓度的，为临床试验的生物分析提供有力的工具，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值，

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种识别贝伐珠单抗的单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体能够结合抗贝伐珠单抗，作为监测评估药物代谢过程的工具，在临床分析贝伐珠单抗的药物代谢方面发挥重要作用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种识别贝伐珠单抗的单克隆抗体，所述单克隆抗体的轻链CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO.3，轻链CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO.4，轻链CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO.5；

所述单克隆抗体的重链CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO.6，重链CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO.7，重链CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO.8。

所述单克隆抗体Fab段的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.1，所述单克隆抗体Fab段的重链氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

所述SEQ ID NO.1如下所示：

DIVLTQTPASLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGPSWK.

所述SEQ ID NO.2如下所示：