[发明专利]NS1蛋白的结合蛋白

说明书

本发明提供的包括与NS1蛋白结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白，包括特定的重链CDR和轻链CDR。该结合蛋白能够特异性地识别并结合NS1蛋白，具有较高的灵敏度和特异性，从而实现对登革热病毒的检测。并且，无需利用小鼠腹腔诱生杂交瘤细胞来生产该结合蛋白，生产难度小的同时，抗体功能更加稳定。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学技术领域，尤其是涉及一种NS1蛋白的结合蛋白。

背景技术

登革热(dengue fever,DF)是由4个血清型病毒(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)引起的急性蚊媒传染病，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。DF是分布最广，发病最多，危害较大的一种虫媒病毒性疾病，广泛流行于全球热带和亚热带的非洲、美洲、东南亚和西太平洋地区的100多个国家和地区。

在临床上，DF是一种严重的流感样的疾病。主要表现为起病突然、高热、剧烈头痛、眼眶后痛、肌肉和关节痛，可伴有皮疹、淋巴腺肿和白血球减少，可波及所有人群，但症状可因病人的年龄不同而不同。一般将这种病型称为古典登革热，此类型传播迅速，可引起较大规模的流行。在登革热流行期，易感人群的罹患率通常为40％-50％，可高达80％-90％，但病死率很低。登革热出血热是以高热、出血、肝大，严重病例循环衰竭为特征，病死率高，是较为严重的一种临床类型。伴有休克综合症的称为登革休克综合症。

登革热没有特效的治疗方法。如果没有适应的治疗，登革出血热的病死率可超过20％，经过有效的支持疗法，病死率可低于1％。登革热诊断要点：1)流行病学资料，发病关15天的活动情况，有否去过流行区，蚊虫叮咬历；2)临床特征，突然起病，发热，“三痛三红”，皮诊；3)实验室检查，白细胞、血小板下降；检测血清特性IgM阳性；恢复期IgG比急性期有4倍增长；分离到病毒或特异性抗原。临床上用于登革病毒的检测方法有病毒培养、血清学检测、病毒核酸检测等。病毒分离所需时间较长，达不到快速诊断的目的，而常规的血清学诊断又因存在广泛的交叉反应而受到干扰。胶体金标记的免疫层析方法具有快速、简便、不需要依赖重要装备、能够实现现场检测等特点，成为目前传染病快速诊断中研究的热点。NS1蛋白是登革病毒非结构蛋白中唯一的糖蛋白，抗原性极强且不引发ADE，所以作为胶体金检测的靶标。而胶体金检测需要针对NS1蛋白的特异性单克隆抗体，传统临床用的都是鼠源性的单克隆抗体。长期以来，鼠单克隆抗体被广泛的应用于科研、临床诊断和治疗。但由于杂交瘤方式生产采用小鼠腹腔诱生，受小鼠个体影响特别大，生产不稳定、批间差大、含小鼠自身抗体纯化难度大。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明是基于所获得的Anti-Dengue NS1 7D9单克隆抗体，通过克隆、鉴定与基因结构的分析，确定了其CDR区序列，构建了相应的包括与NS1蛋白结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并建立了相应的真核细胞表达系统，生产纯化出了该结合蛋白。

本发明提供的包括与NS1蛋白结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与NS1蛋白具有KD≤6.12×10^-8mol/L的亲和力；

互补决定区CDR-VH1为A-S-G-Y-X1-F-T-G-X2-Y-M-H，其中，

X1是S或T，X2是F、Y或L；

互补决定区CDR-VH2为R-V-N-P-X1-N-G-G-X2-S-Y-N-Q-K-F-X3-G，其中，

X1是Q、D或N，X2是S或T，X3是V、I或F；

互补决定区CDR-VH3为A-X1-E-G-X2-H-Y-D-R-A，其中，

X1是Q、N或R，X2是V、F或Y；