[发明专利]一种庆大霉素在制备tmRNA抑制剂中的新用途

说明书

本发明公开了庆大霉素在制备tmRNA抑制剂中的新用途。本发明研究显示，庆大霉素具有细菌tmRNA抑制剂的功能，与阿奇霉素联用以可增强阿奇霉素对铜绿假单胞菌的杀菌效果。

【技术领域】

本发明属于医药技术领域，涉及的是一种庆大霉素的新功能和新用法。

【背景技术】

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种常见的革兰氏阴性条件致病菌，对免疫缺陷病人、肺囊性纤维化和慢性肺阻塞性疾病的病人具有很强的致病性。尤其是对于肺囊性纤维化病人，铜绿假单胞菌感染是其主要的发病和死亡原因。目前临床上主要的治疗铜绿假单胞菌感染的方法是使用抗菌药物进行治疗，但随着细菌耐药现象越来越严重，可用的抗生素越来越少，研究铜绿假单胞菌耐药机制，寻找可能药物靶点，开发新型抗生素成为一个亟待解决的重大问题。

tmRNA作为一个可能的抗菌药物新靶点引起了广泛关注。tmRNA也称SsrA，因具有tRNA和mRNA的双重功能而得名。它由三百多个碱基组成，含有保守的类似tRNA结构域，能够被丙氨酰-tRNA合成酶识别，携带丙氨酸。tmRNA还有一段类似mRNA结构域，含一段小的阅读框，有正常的终止密码子，其编码的肽链为一段可被蛋白酶识别的标记。在细菌的生命过程中有许多原因会造成mRNA发生异常，使阅读框缺乏终止密码子，核糖体停滞在mRNA上不能循环，影响正常生命过程，在这种情况下，tmRNA可以转载上丙氨酸，后与SmpB,EF-Tu和GTP共同作用使核糖体延tmRNA的mRNA结构域段继续翻译最终释放核糖体，同时给肽段加上一段蛋白酶识别序列使其被降解，维持细菌的正常生命活动。tmRNA在细菌中非常保守，而在真核生物中并不存在，很有希望能够成为抗菌药物的新靶点，现已有人研究出tmRNA的抑制剂KKL-35对耻垢分枝杆菌，炭疽杆菌具有良好的杀菌作用。铜绿假单胞菌中也存在tmRNA结构，并且在缺失tmRNA结构后，细菌对阿奇霉素的敏感性明显增强。阿奇霉素是一种常见的大环内酯类抗生素，可以抑制铜绿假单胞菌的密度感应系统，抑制生物被膜形成，还能够抑制炎症反应，在治疗铜绿假单胞菌感染方面具有独特的优势，目前作为治疗肺囊性纤维化病人铜绿假单胞菌感染的一线药物在使用，但阿奇霉素的杀菌效果不强。而在tmRNA缺失后，阿奇霉素对于铜绿假单胞菌的杀伤作用增强了近百倍。如果能够添加tmRNA的抑制剂，将有效增强阿奇霉素的杀菌作用以及治疗效果。

【发明内容】

本发明的目的是利用庆大霉素抑制tmRNA这一新功能，开发庆大霉素在制备tmRNA抑制剂中的新用途，提供一种提高细菌对阿奇霉素敏感性的方法。从而研究旧有药物的新功能，为新药开发提供新思路。

本发明的技术方案

庆大霉素在制备tmRNA抑制剂中的新用途。

本发明通过两种不同方法验证了庆大霉素对tmRNA的抑制作用。

方法1、6×His标签法检测tmRNA功能。铜绿假单胞菌野生型PA14敲除ssrA基因后插入基因组回补ssrA-His6构建ΔssrA/ssrA-His6菌株。ΔssrA/ssrA-His6菌株的tmRNA中mRNA结构域被部分突变为6个组氨酸，最终通过tmRNA介导的反式翻译系统被释放的肽段都携带上了His标签,通过Western blotting检测His即可反映tmRNA功能水平。将ΔssrA/ssrA-His6培养至稳定期，分别加入阿奇霉素，庆大霉素，阿奇霉素+庆大霉素处理1小时，离心收集细菌，制样，westernblotting检测tmRNA功能。