[发明专利]肺腺癌检测试剂盒及检测TULP2基因甲基化水平的方法在审
| 申请号： | 201811000101.3 | 申请日： | 2018-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN108998529A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 沈楠;杜白露;潘艺;莫茜;陶悦;周辉;马靖;殷敏智;顾松;徐敏;曹清;干驰;赵瑞珂 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 上海韧辰专利代理有限公司 31331 | 代理人： | 刘秋兰 |
| 地址： | 200127 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因甲基化 检测试剂 肺腺癌 检测 实时荧光定量PCR 甲基化探针 反向引物 非甲基化 正向引物 基因 癌组织 探针 | ||
1.一种肺腺癌检测试剂盒，其特征在于所述肺腺癌检测试剂盒包括如SEQ ID NO:1序列所示的TULP2基因正向引物、如SEQ ID NO:2序列所示的TULP2基因反向引物、如SEQ IDNO:3序列所示的甲基化探针、如SEQ ID NO:4序列所示的非甲基化探针；和实时荧光定量PCR检测试剂。
2.如权利要求1所述的肺腺癌检测试剂盒，其特征在于所述实时荧光定量PCR检测试剂为DNA聚合酶预混液。
3.如权利要求1所述的肺腺癌检测试剂盒，其特征在于所述DNA聚合酶预混液具体为：DNA聚合酶、PCR缓冲液、dNTP混合液和荧光物质染料。
4.如权利要求1所述的肺腺癌检测试剂盒，其特征在于所述TULP2基因正向引物的体积为1～3μL优选2μL，浓度为0.3～0.5μm优选0.4μm；TULP2基因反向引物的体积为1～3μL优选2μL，浓度为0.3～0.5μm优选0.4μm；甲基化探针的体积为0.4～0.6μL优选0.5μL，浓度为0.1～0.3μm优选0.2μm；和非甲基化探针的体积为0.4～0.6μL优选0.5μL，浓度为0.05～0.2μm优选0.1μm。
5.如权利要求2所述的肺腺癌检测试剂盒，其特征在于所述DNA聚合酶预混液25μL。
6.一种检测TULP2基因甲基化水平的方法，其特征在于包括如下步骤：
S1，提取生物样品中的DNA；
S2，重亚硫酸盐转化提取到的DNA；
S3，使用权利要求1所述的肺腺癌检测试剂盒实时荧光定量PCR扩增转化后的DNA，以检测TULP2基因甲基化水平。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤S1中采用磁珠法提取生物样本中的DNA。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于实时荧光定量PCR扩增条件是预变性95℃30min循环1次；变性95℃10s，退火延伸56℃30s，循环50次。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述生物样品为可疑癌组织以及可疑癌旁组织。
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