[发明专利]生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法在审

专利信息
申请号: 201811000130.X 申请日: 2018-08-30
公开(公告)号: CN109468347A 公开(公告)日: 2019-03-15
发明(设计)人: 王健博;张宏霞 申请(专利权)人: 湖南师范大学
主分类号: C12P7/42 分类号: C12P7/42;C12P7/40
代理公司: 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 代理人: 宁星耀;宁冈
地址: 410081 湖*** 国省代码: 湖南;43
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摘要:
搜索关键词: 氟代羧酸 羟基羧酸 氟乙酸 生物催化合成 光学活性 产率 羟基羧酸及其衍生物 立体选择性 生物催化剂 手性化合物 催化底物 光学纯度 水解反应 一步到位 脱卤酶 底物 手性 脱氟 催化 制备 能耗 放大 合成
【权利要求书】:

1.一种生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将氟乙酸脱卤酶的表达载体转入表达菌株中,培养表达;(2)收集表达好的全细胞或无细胞提取物进行冷冻干燥作为生物催化剂;(3)以α-氟代羧酸或α-氟代羧酸及其衍生物为底物,加入生物催化剂,在缓冲液中进行反应,得反应液;(4)将反应液进行酸化,加入萃取剂进行萃取,得萃取液;(5)将萃取液进行层析分离,获取手性纯的2R-羟基羧酸和2R-氟代羧酸。

2.根据权利要求1所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(1)中所述氟乙酸脱卤酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1 所示。

3.根据权利要求1所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(2)中所述生物催化剂为具有氟乙酸脱卤(氟、氯、溴、碘)酶氨基酸序列的同类蛋白酶。

4.根据权利要求1~3之一所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(3)中生物催化合成反应体系为:pH=6.5~8.7,30~100℃条件下,于30~100mM三羟甲基氨基甲烷-硫酸缓冲体系中,底物与生物催化剂的质量比为50~100∶1,控制搅拌转速为100~300 rpm,反应时间为1~3h。

5.根据权利要求1或2或4所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(2)中所述生物催化剂为脱氟酶RPA1163,每升反应液的生物催化剂用量为10~50g。

6.根据权利要求1~5之一所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(5)中所述萃取液通过柱层析的分离手段得到手性纯的2R-羟基羧酸和2R-氟代羧酸。

7.根据权利要求1~6之一所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(1)中所述氟乙酸脱卤酶的表达载体为pET28a或pET30a或pBAD。

8.根据权利要求1~7之一所述的生物催化合成光学活性2R-氟代羧酸和2R-羟基羧酸的方法,其特征在于,步骤(1)中所述表达菌株为 BL21(DE3)或Roseta。

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