[发明专利]一种谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有：缓冲液、EDTA、谷胱甘肽还原酶、还原型谷胱甘肽、氯化钾、氯化镁、表面活性剂、稳定剂、防腐剂；试剂R2中含有：缓冲液、EDTA、NADPH、过氧化氢异丙基苯、表面活性剂、稳定剂、防腐剂。同时公开了该试剂盒的制备方法和应用。本发明的试剂盒是一种灵敏度高、稳定性好的液体试剂盒。

技术领域

本发明涉及生化试剂测定技术领域，特别涉及一种谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒，还涉及所述谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒的制备方法和应用。

背景技术

谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体硒水平。硒是GSH-Px酶系的组成成分，它能催化GSH变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。NADPH的减少量则和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。GSH-Px主要包括4种：分别为胞浆GSH-Px、血浆GSH-Px、磷脂氢过氧化物GSH-Px及胃肠道专属性GSH-Px。胞浆GSH-Px:由4个相同的分子量大小为22kDa的亚基构成四聚体，每个亚基含有1个分子硒半胱氨酸，广泛存在于机体内各个组织，以肝脏红细胞为最多。它的生理功能主要是催化GSH参与过氧化反应，清除在细胞呼吸代谢过程中产生的过氧化物和羟自由基，从而减轻细胞膜多不饱和脂肪酸的过氧化作用；血浆GSH-Px：构成与胞浆GSH-Px相同，主要分布于血浆中，其功能目前还不是很清楚，但已经证实与清除细胞外的过氧化氢和参与GSH的运输有关；磷脂过氧化氢GSH-Px：是分子量为20kDa的单体，含有1个分子硒半胱氨酸。最初从猪的心脏和肝脏中分离得到，主要存在于睾丸中，其它组织中也有少量分布。其生物学功能是可抑制膜磷脂过氧化；胃肠道专属性GSH-Px:是由4个分子量为22kDa的亚基构成的四聚体，只存在于啮齿类动物的胃肠道中，其功能是保护动物免受摄入脂质过氧化物的损害。

GSH-Px具有非常重要的生物学作用：1.清除脂类氢过氧化物:GSH-Px的主要作用是清除脂类氢过氧化物。GSH-Px可催化LPO分解生成相应的醇,防止LPO均裂和引发脂质过氧化作用的链式支链反应,减少LPO的生成以保护机体免受损害。2.清除H₂O₂:脑与精子中几乎不含过氧化氢酶，而含较多的GSH-Px，代谢中产生的H2O2可以被GSH-Px清除。即使含过氧化氢酶较多的组织，仍需GSH-Px清除H₂O₂，因为在细胞中过氧化氢酶多存在于微体，而在胞浆和线粒体中却很少，组织中较多的GSH-Px可及时清除H₂O₂；如有的病人缺乏产生过氧化氢酶的基因，但GSH-Px可清除H₂O₂，故H₂O₂损伤组织不明显。3.减轻有机氢过氧化物对机体的损伤:在病理生理情况下，活性氧如·OH可能诱发脂类过氧化，除了直接造成生物膜损伤外，还可以通过脂类氢过氧化物与蛋白质、核酸反应，使机体发生广泛性损伤。如果GSH-Px清除脂类氢过氧化物能力不受影响，机体的损伤就可减轻。除了脂类氢过氧化物外，还可能出现其他有机氢过氧化物，如核酸氢过氧化物、胸腺嘧啶氢过氧化物，这两者属于致突变剂，GSH-Px清除有机氢过氧化物的作用可降低致突发生率。脂类过氧化也是细胞老化的原因之一，预防脂类过氧化可延缓细胞老化，所以GSH-Px在预防衰老方面起到重要作用。4.参与前列腺素合成的调节:前列腺素在体内分布较广，其合成原料为花生四烯酸。但在环氧酶与脂氧合酶的作用下，花生四烯酸尚可氧化成某些氢过氧化物(ROOH)。这些氢过氧化物显著干扰前列腺素的生物合成。在GSH-Px的作用下，ROOH可转变为无活性物质(ROH)，故GSH-Px对前列腺素的生物合成起到调节作用。5.其他作用:硒和GSH系统在氧化防御反应中起着关键作用。其他含硒蛋白也有抗氧化特性。硒蛋白和有机硒复合物可以催化过亚硝酸盐反应生成NO₂，在预防过亚硝酸盐的生成中也起着重要作用，可以保护细胞免受过亚硝酸盐的损害。