[发明专利]鸡细小病毒、禽流感病毒和鸡新城疫病毒三重PCR检测方法的建立

说明书

本发明公开了鸡细小病毒、禽流感病毒和鸡新城疫病毒三重PCR检测方法的建立。本发明提供了成套引物，其由如下引物1至引物6组成：所述引物1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述引物3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；所述引物4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；所述引物5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；所述引物6为序列表的序列6所示的单链DNA分子。本试验所建立的ChPV、AIV和NDV三重PCR方法可以用于临床ChPV、AIV和NDV的混合感染的快速检测，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鸡细小病毒、禽流感病毒和鸡新城疫病毒三重PCR检测方法的建立。

背景技术

禽流感(Avian influenza,AI)是禽流行性感冒的简称，是一种由A型流感病毒引起的禽类传染病，通常表现为突然发病且无明显症状；病程稍长则有明显的神经系统、消化道、呼吸道和生殖道等症状，并可能伴随有采食量减少，产蛋量下降，且易感染并发其他疾病，造成严重的经济损失。禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV) 为由8个独立节段组成的单股负链RNA，包含HA、NA、M、PB1、PB2、NP、PA、NS。

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种多病型的急性、高度接触性传染病。当禽类感染NDV时，发病急，病情重，常出现高热、黏膜出血、呼吸困难及下痢等症状，且引起较高的死亡率。NDV 由一条不分节段的单股负链RNA组成，包含NP、P、M、F、HN和L，共6种结构蛋白。目前，AI和ND是影响养禽业发展的主要疾病，我国已将其列为一类动物疫病，也是我国规模化鸡场的常发病和多发病。AI与ND均由病毒感染引起，冬春两季高发，具高度传染性，因二者在症状上形似，故感染ND的鸡群易被养殖户误认为AI，导致因处理措施选择不当从而延误了鸡群病情。

鸡细小病毒(Chincken parvovirus，ChPV)是引起鸡肠道类疾病的重要病原体之一，可以引起鸡群出现以腹泻、精神抑郁、体温调节障碍、生长迟缓、增加饲料消耗等为特征的急性或慢性肠道性疾病、营养不良综合征、发育不良与矮小综合征 (runting andstunting syndrome,RSS)。ChPV在鸡群中普遍存在，主要侵害雏鸡，其中商品肉鸡感染率较高，蛋鸡或种鸡次之。自2010年以来，北美、波兰、匈牙利、巴西、克罗地亚，韩国 等国家相继暴发了该病，给养鸡业造成较大的经济损失。

当两种及多种病毒混合感染时，在临床诊断中很难做出准确判断，常规方法(比如病原分离鉴定和血清学试验等)费时费力，而且不易进行鉴别诊断。

发明内容

本发明的一个目的是提供鉴定鸡细小病毒、禽流感病毒和鸡新城疫病毒的成套引物。

本发明提供的成套引物，其由如下引物1至引物6组成：

所述引物1为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物2为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物3为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；