[发明专利]鸡细小病毒和鸡新城疫病毒二重PCR检测方法的建立

说明书

本发明公开了鸡细小病毒和鸡新城疫病毒二重PCR检测方法的建立。本发明提供了本发明提供了鉴定鸡细小病毒和鸡新城疫病毒的成套引物，其由如下引物1至引物4组成：所述引物1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述引物3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；所述引物4为序列表的序列4所示的单链DNA分子。本试验所建立的ChPV和NDV二重PCR方法可以用于临床ChPV和NDV的混合感染的快速检测，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鸡细小病毒和鸡新城疫病毒二重PCR检测方法的建立。

背景技术

鸡细小病毒(Chincken parvovirus，ChPV)是引起鸡肠道疾病重要的病原体之一，可以引起鸡群出现以腹泻、精神抑郁、体温调节障碍、生长迟缓、增加饲料消耗等为特征的急性或慢性肠道性疾病、矮小综合症、营养不良综合症。在鸡群中普遍存在，主要侵害雏鸡，其中以商品肉鸡感染率较高，蛋鸡或种鸡次之。自2010年以来，北美、波兰、巴西、匈牙利、克罗地亚和韩国 等国家相继暴发了该病，给养鸡业造成较大的经济损失。新城疫(Newcastledisease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一种多病型的急性、高度接触性传染病。当禽类感染NDV时，发病急，病情重，常出现高热、黏膜出血、呼吸困难及下痢等症状，且引起较高的死亡率。NDV 由一条不分节段的单股负链RNA组成，包含NP、P、M、F、HN和L，共6种结构蛋白。目前，ND是影响养禽业发展的主要疾病，我国已将其列为一类动物疫病，也是我国规模化鸡场的常发病和多发病。而ChPV是养禽业中的一种新发传染病病毒，在世界范围内流行，ChPV和NDV引起的疾病给我国养禽业带来极大的经济损失，因此，建立一种快速检测ChPV与NDV的诊断方法十分必要。Zsak等根据ChPV NS1基因的保守序列，建立了ChPV的快速特异PCR检测方法；Carratalà等建立了检测ChPV的TaqMan探针荧光定量PCR；Finkler等根据ChPV NS1基因的保守序列建立了SYBR Green-based 荧光定量PCR方法；奉彬等建立了检测ChPV半巢式PCR方法。明文龙等建立了鉴别 NDV强弱毒一步RT-PCR；周小桐等建立了检测NDV的real-time RT-PCR。

发明内容

本发明的一个目的是提供鉴定鸡细小病毒和鸡新城疫病毒的成套引物。

本发明提供了鉴定鸡细小病毒和鸡新城疫病毒的成套引物，其由如下引物1至引物4组成：

所述引物1为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物2为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物3为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物4为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。