[发明专利]鉴定齿瓣延胡索的SNP标记、等位基因特异性PCR法及应用在审
| 申请号： | 201811011181.2 | 申请日： | 2018-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN108998559A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 程铭恩;蒋露;彭华胜;查良平;产清云;于大庆 | 申请（专利权）人： | 安徽中医药大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙) 34124 | 代理人： | 王亚洲 |
| 地址： | 230012 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 延胡索 齿瓣 等位基因特异性 对齿 应用 生物技术领域 特异性引物 等位基因 加工制品 特异性强 药用部位 种鉴定 测序 真伪 | ||
1.用于鉴定齿瓣延胡索的SNP分子标记，其特征在于：所述SNP分子标记如SEQ ID NO.1所示，为SNP3和/或SNP4，其中SNP3为如SEQ ID NO.1所示序列的第229位碱基，此处碱基为G，则鉴定为齿瓣延胡索；其中SNP4为如SEQ ID NO.1所示序列的第541位碱基，此处碱基为A，则鉴定为齿瓣延胡索。
2.根据权利要求1所述的SNP分子标记的应用，其特征在于：为如下(a1)至(a3)中的任意一种：
a1:检测所述齿瓣延胡索分子标记的物质鉴定或辅助鉴定齿瓣延胡索中的应用；
a2:检测所述齿瓣延胡索分子标记的物质在制备鉴定或辅助鉴定齿瓣延胡索产品中的应用；
a3:所述SNP分子标记在齿瓣延胡索分子标记辅助育种中的应用。
3.基于等位基因PCR检测齿瓣延胡索的特异性引物对T1，其特征在于：包括上游引物TUR-1F：5’-CTCTAGAGGAGGGGAATACG-3’，所述上游引物TUR-1F序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物TUR-1R：5’-TCTCGTGATTTCTATCCAAGAT-3’，所述下游引物TUR-1R序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求3所述的引物对的应用，其特征在于：为如下(b1)至(b3)中的任意一种：
b1:鉴定待测药材是否为或待测样品中是否含有齿瓣延胡索；
b2:制备用于鉴定待测药材是否为或待测样品中是否含有齿瓣延胡索的试剂盒；
b3:在齿瓣延胡索育种中的应用。
5.根据4所述的引物对的应用，其特征在于：所述试剂盒中还包括DNA聚合酶、PCR缓冲液、dNTPs。
6.基于等位基因特异性PCR检测齿瓣延胡索的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)提取待测样品基因组DNA；
(2)以待测样品的基因组DNA为模板，利用上述引物对进行PCR扩增反应，扩增含有如SEQ ID NO.1所示序列的片段；
(3)检测PCR扩增产物。
7.根据权利要求6所述的基于等位基因特异性PCR检测齿瓣延胡索的方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR反应体系包括所述引物对、DNA聚合酶、PCR缓冲液、所述待测样品基因组DNA、dNTPs和水。
8.根据权利要求6所述的基于等位基因特异性PCR检测齿瓣延胡索的方法，其特征在于：所述步骤(2)中引物对T1的最低模板检测限度为6ng，所述引物对TUR-1F和TUR-1R的摩尔比为1:1。
9.根据权利要求6所述的基于等位基因特异性PCR检测齿瓣延胡索的方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR扩增程序包括变性、退火和延伸，所述退火温度为42℃-60℃，所述3个步骤的循环次数为20个。
10.根据权利要求6所述的基于等位基因特异性PCR检测齿瓣延胡索的方法，其特征在于：检测步骤(3)中PCR扩增产物的序列，所述PCR产物含有SEQ ID NO.1序列中所示的DNA片段，所述待测样品为为齿瓣延胡索；所述PCR产物不含有SEQ ID NO.1序列中所示的DNA片段，所述待测样品为非齿瓣延胡索。
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