[发明专利]一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法

说明书

本发明公开了一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，包括如下步骤：(1)将海藻酸钾粉末配成质量浓度为3‑4.8％的海藻酸钾水溶液，搅拌均匀；(2)将海藻酸钾水溶液置于35‑39℃水浴中，加入褐藻胶裂解酶，搅拌酶解；(3)酶解后进行醇沉，得到小分子海藻酸钾。本发明方法步骤简单，条件温和，制备得到的小分子海藻酸钾分子量稳定在较小范围内，且古罗糖醛酸含量高，既可作为食品添加剂，又可用作药品以及功能食品。

技术领域

本发明涉及小分子海藻酸钾制备技术领域，更具体的说是涉及一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法。

背景技术

海藻酸钾(Potassium Alginate)又称为褐藻酸钾，分子式为(C₆H₇O₆K)n，由β-D-甘露糖醛酸和α-L-古罗糖醛酸通过1,4-糖苷键连接而成，主要来自海带、裙带菜等海洋褐藻植物，目前作为食品添加剂及药用辅助剂广泛应用于医药和食品行业中。

在临床研究中已观察到海藻酸钾散剂的降压效果，大分子的海藻酸钾虽然具有一定降压效果，但由于分子量大、胃肠道反应较明显且体内吸收不良，严重影响个体用药的依从性和临床应用；而高古罗糖醛酸含量的小分子褐藻胶能降低LPS诱导的炎症效应，并且有较高的抗病原菌、抗真菌活性。

现有技术中通常采用固化酶与复合酶两步酶解法制备低分子海藻酸钾，其步骤繁琐，且获得的海藻酸钾分子量范围较大，定向性较差。此外，研究人员尝试通过酸水解或碱水解法制备小分子海藻酸钾，但均容易对海藻酸钾的结构造成破坏。

因此，如何提供一种步骤简单、条件温和且能够定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，其步骤简单，条件温和，制备得到的小分子海藻酸钾分子量稳定在较小范围内，且古罗糖醛酸含量高。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种定向制备高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾的方法，包括如下步骤：

(1)将海藻酸钾粉末配成质量浓度为3-4.8％的海藻酸钾水溶液，搅拌均匀；

(2)将海藻酸钾水溶液置于35-39℃水浴中，加入褐藻胶裂解酶，搅拌酶解；

(3)酶解后进行醇沉，得到小分子海藻酸钾。

优选地，步骤(1)中海藻酸钾的分子量为600-1000kDa，古罗糖醛酸含量为10％-30％。

酶解底物分子量较大，古罗糖醛酸含量较低，在特定的酶解条件下使用褐藻胶裂解酶进行一步酶解，定向制备得到高古罗糖醛酸含量的小分子海藻酸钾，分子量稳定，生物活性高。

进一步优选地，步骤(1)中海藻酸钾的分子量为800kDa。

优选地，步骤(2)中初始添加褐藻胶裂解酶的体积分数为0.1-0.25％；

酶解过程中每隔0.5-0.8h补充褐藻胶裂解酶，补充的褐藻胶裂解酶浓度逐渐降低；酶解时间为6-8h，pH为7-9。

进一步优选地，酶解过程中每隔0.8h补充褐藻胶裂解酶，补充的褐藻胶裂解酶浓度逐渐降低；酶解时间为6h，pH为8。

褐藻胶裂解酶浓度、酶解时间、补充频率均保证了酶解产物的稳定性。

优选地，编码褐藻胶裂解酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1。

优选地，褐藻胶裂解酶的制备方法如下：