[发明专利]2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮在制备蛋白质N-乙酰葡萄糖胺修饰抑制剂中的应用

说明书

本发明公开了2，3，2”，3”‑四氢金连木黄酮在制备蛋白质N‑乙酰葡萄糖胺修饰抑制剂中的应用，2，3，2”，3”‑四氢金连木黄酮作用受体为N‑乙酰葡萄糖胺转移酶；2，3，2”，3”‑四氢金连木黄酮通过与UDP结合口袋内His920，Thr922,Thr921和Lys842形成氢键，进而占据N‑乙酰葡萄糖胺转移酶的UDP结合口袋，抑制N‑乙酰葡萄糖胺转移酶活性。通过体外及细胞内的OGT抑制活性分析发现，2，3，2”，3”‑四氢金连木黄酮具有较好的OGT抑制活性，能够有效抑制蛋白质的O‑GlcNAc修饰。同时2，3，2”，3”‑四氢金连木黄酮不会影响细胞内蛋白质的其他糖基化修饰，说明2，3，2”，3”‑四氢金连木黄酮是特异性OGT抑制剂。

技术领域

本发明涉及2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮的新应用，具体涉及2，3，2”， 3”-四氢金连木黄酮在制备蛋白质N-乙酰葡萄糖胺修饰抑制剂中的应用，其对 N-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)的抑制作用。

背景技术

N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种普遍存在于胞内的蛋白质翻译后修饰，这种单糖修饰能够调节细胞质，线粒体和细胞核内多种蛋白质的功能。研究表明，O-GlcNAc糖基化修饰与几乎所有重大疾病和重要的生理病理过程相关。目前，细胞内已发现超过3000种蛋白能够发生O-GlcNAc修饰。

N-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)通过将底物糖供体尿嘧啶二磷酸-N-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)上的N-乙酰葡萄糖胺部分，转移到底物蛋白的丝氨酸或苏氨酸残基上，调控蛋白质的O-GlcNAc修饰。OGT存在于几乎所有的哺乳动物细胞内。OGT基因在生物体内组成型表达，敲除OGT基因都会导致生物体正常生理功能的变化，引起死亡。目前OGT与底物糖功能的共结晶已经得到解析，对其活性口袋与底物作用的氨基酸残基也得到了确认。既然OGT的活性与包括神经退行性疾病、糖尿病、癌症等一系列疾病的发生发展密切相关，那么通过化学手段抑制OGT活性，将有望调节这些生理过程。

2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮是一种天然产物，是黄酮类化合物，化学名为：2-[4-[5－(5,7-二羟基-4-氧代-2,3－二氢铬代-2-基)-2-羟基苯氧基]苯基]-5,7- 二羟基-2,3-二氢铬烯-4-酮，结构式如下：

2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮是一种黄酮类化合物,自然界广泛存在于卷柏属植物中。已报道的生物活性包括抗炎、抗肿瘤、抗辐射、清除自由基和神经保护等，但其分子机制不明。

发明内容

本发明旨在提供2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮在制备OGT抑制剂，抑制蛋白质O-GlcNAc修饰中的应用。

2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮在制备蛋白质N-乙酰葡萄糖胺修饰抑制剂中的应用，2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮作用受体为N-乙酰葡萄糖胺转移酶； 2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮通过占据N-乙酰葡萄糖胺转移酶的UDP结合口袋抑制其活性。

进一步地，2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮通过与UDP结合口袋中的His920， Thr922，Lys842和Thr921形成氢键，以竞争性抑制方式占据N-乙酰葡萄糖胺转移酶的UDP结合口袋，抑制N-乙酰葡萄糖胺转移酶活性。

本发明的有益效果为：通过体外及细胞内的OGT抑制活性分析发现，2，3， 2”，3”-四氢金连木黄酮具有较好的OGT抑制活性，能够有效抑制蛋白质的 O-GlcNAc修饰。同时2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮不会影响细胞内蛋白质的其他糖基化修饰，说明2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮是特异性OGT抑制剂。

附图说明

图1是UDP荧光法检测不同浓度的2，3，2”，3”-四氢金连木黄酮在体外对OGT活性的抑制效果，进一步计算获得IC₅₀值。