[发明专利]副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法

说明书

本发明属于疫苗生产技术领域，具体公开了副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法。本发明利用生物反应器进行猪肺炎支原体的发酵培养，利用发酵罐进行血清4型副猪嗜血杆菌和血清5型副猪嗜血杆菌的发酵培养；将发酵培养后的菌液灭活、浓缩、纯化，再按一定比例混合，并加入免疫增强剂和疫苗佐剂，得到副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗。本发明生产的疫苗组合物具有特异性强、免疫性好的特点，可起到一针防二种疾病的目的，该技术方案更加经济实用，避免多次接种，节约了疫苗成本和人工成本，特别适用于预防和治疗混合感染病症的养殖场。

技术领域

本发明属于疫苗生产技术领域，具体地说，涉及副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产。

背景技术

副猪嗜血杆菌病近年来一直是猪病中最重要的细菌病之一，严重影响我国养猪业的健康发展。副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)能引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎，可以影响从2周龄的哺乳仔猪到4月龄的育肥猪，主要在断奶后和保育阶段发病，多见于5～8周龄的猪，发病率一般在10％～15％，严重时病死率高达50％。本发明对2013～2017年分离的所有细菌进行分析，结果表明副猪嗜血杆菌分离率达到30.8％左右，其中分离的副猪嗜血杆菌血清4型占26.9％，血清5型占25.5％，说明副猪嗜血杆菌仍然是威胁养猪业最重要的细菌性疾病之一，副猪嗜血杆菌血清4型和5型仍是我国流行的主要血清型。另外，副猪嗜血杆菌病易与猪链球菌病、猪繁殖与呼吸障碍综合症、猪支原体肺炎以及其它疾病发生混合或继发感染。

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的呼吸道疾病。该疾病导致仔猪生长缓慢和饲养效率降低，是养猪业经济损失的重要原因。该疾病导致持续几周的持续性咳嗽、被毛失去光泽、生长迟缓和外观不壮实。虽然该疾病的死亡率低，但受感染的猪常常易于受到机会病原体的继发感染，从而导致死亡或应激。

猪支原体肺炎可引起猪的免疫抑制，从而使机体更易感染其他病原，这也是副猪嗜血杆菌病与猪支原体肺炎病混合感染的重要原因，混合感染病猪的病死率也将大大提高，有的可达25％～40％。

但是，由于联合疫苗(疫苗组合物)，如二联疫苗或三联疫苗中，多种抗原相互间存在干扰或影响，导致目前市场上还未见有副猪嗜杆菌病、猪支原体肺炎二联苗的产品。

不仅如此，现有文献中记载的涉及猪支原体肺炎的疫苗，多利用发酵罐进行培养，由于培养时间长，增加人力和生产成本,而且加大污染风险。

因此，急需提供一种在获得较高免疫原性的同时，缩短培养时间，降低生产成本的二联疫苗的生产方法，以预防由猪肺炎支原体引起的猪肺炎支原体、或副猪嗜血杆菌引起的副猪嗜血杆菌病、或二种混合感染的疾病。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗的生产方法，其特征在于，利用生物反应器进行猪肺炎支原体的发酵培养，利用发酵罐进行血清4型副猪嗜血杆菌和血清5型副猪嗜血杆菌的发酵培养；将发酵培养后的菌液灭活，再分别将血清4型副猪嗜血杆菌和血清5型副猪嗜血杆菌通过管式离心机离心；将猪肺炎支原体通过膜包浓缩纯化，根据离心前细菌计数结果，用生理盐水调整合适菌液浓度后混合，再加入免疫增强剂CIA 303，最后再与疫苗佐剂Summit-S550混合乳化，得到副猪嗜血杆菌和猪肺炎支原体二联灭活疫苗。