[发明专利]一种五碳糖糖基转移酶及其用途

说明书

本发明提供了一种五碳糖糖基转移酶基因HVUL1H37998，本发明还提供了包含该基因的重组载体、重组菌的制备方法，本发明还提供了五碳糖糖基转移酶及其制备方法。本发明五碳糖糖基转移酶可以合成中药单体根皮素8‑阿拉伯糖苷，应用前景优良。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种五碳糖糖基转移酶的基因的应用。

背景技术

根皮素是一类具有抗氧化、抗自由基、抗炎、免疫抑制活性的黄酮类物质，五碳糖基化的根皮素是根皮素的一种稳定形式。

青稞是禾本科大麦属的一种禾谷类作物，因其内外颖壳分离，籽粒裸露，故又称裸大麦、元麦、米大麦。主要产自中国西藏、青海、四川、云南等地，是藏族人民的主要粮食。

青稞还具有一定的药用价值，现有技术尚未公开其中的五碳糖基化黄酮的存在。

发明内容

为了更好地利用和提升青稞的药用价值，本发明提供了一种利用UDP戊糖苷催化形成C戊烯化的黄酮类化合物的酶。

本发明提供了一种基因(根皮素8-阿拉伯糖苷酰基转移酶基因HVUL1H37998)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供了一种重组载体，它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

前述的重组载体，所述重组载体是重组pGEX-6P-1(Novagen)。

前述的重组菌，它包含前述的重组载体。

前述的重组菌，所述重组菌为Transetta(DE3)。

本发明还提供了一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

前述蛋白的方法，它是采用前述重组菌发酵制备。

前述蛋白的方法，步骤如下：

(1)取前述重组菌，活化，得菌液；

(2)将菌液接种到LB培养基中培养，3～4h后，加入IPTG诱导剂诱导培养，收集菌体；

(3)破菌，离心，取上清，纯化，即可。

步骤(1)中，所述菌液的浓度为1×10⁶～10⁷cfu/ml；优选地，所述活化是采用含有Amp的LB培养基培养培养，培养时间是6-10小时，培养温度为37℃；

和/或，步骤(2)中，所述菌液的接种比例为1:50；所述培养的温度是37℃，转速为200rpm；所述IPTG的浓度为1mol/L，加入量为培养液的1/100000；诱导培养的温度是20℃，转速为160rpm；

和/或，步骤(3)中，所述分离纯化的方法为GST标签融合蛋白纯化方法；优选地，所述纯化方法为：取上清，上树脂柱，穿流2次；采用Lysis buffer冲洗树脂去除杂蛋白；用15mmol/L还原型谷胱甘肽溶液洗脱，得蛋白；进一步优选地，所述树脂是GlutathioneSepharoseTM 4B树脂；所述还原型谷胱甘肽溶液是还原型谷胱甘肽溶于Lysis buffer得到的溶液。

前述的基因片段、重组载体、重组菌、蛋白在制备根皮素8-阿拉伯糖苷方面的用途。

本发明还提供了一种制备根皮素8-阿拉伯糖苷的方法，它是采用前述的基因片段、重组载体、重组菌、蛋白，以UDP戊糖苷作为糖供体，根皮素作为糖受体，制备根皮素8-阿拉伯糖苷。

本发明还提供了前述的基因片段、重组载体、重组菌在制备高产根皮素8-阿拉伯糖苷青稞品种的用途。