[发明专利]防治猫瘟热的特异性卵黄抗体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种防治猫瘟热的特异性卵黄抗体，以FPV灭活苗和FPV亚单位疫苗为免疫原，通过免疫蛋鸡制得。据此建立了相应制备方法，该法创造性的以两种不同FPV免疫原接种蛋鸡，以FPV灭活苗为基础免疫原，以FPV亚单位疫苗为加强免疫原，并优化了免疫接种方法和接种剂量以产生高抗体效价；免疫蛋鸡后，收取高免蛋，分离蛋黄，提取卵黄抗体粗品，并对其进行纯化处理，制备获得抗猫瘟热病毒特异性卵黄抗体。试验表明，本发明的卵黄抗体安全性好、特异性强、抗体效价高，且成本低、产量高，可用于猫瘟热的治疗与紧急预防，增加患病猫的抵抗力，具有很好的推广应用前景。

技术领域

本发明属于猫瘟热治疗技术领域，尤其涉及一种防治猫瘟热的特异性卵黄抗体及其制备方法。

背景技术

猫瘟热又名猫泛白细胞减少症、猫传染性肠炎等，是由猫细小病毒(FPV)引起的猫的一种急性、高度接触性和致死性传染病，临床上以突发高热、呕吐、腹泻及白细胞严重减少为主要特征，是家猫最常见的传染病。FPV只有一个血清型，自然条件下可感染猫科、浣熊科和鼬科等多种动物，其中以小体型猫科动物和水貂最易感。FPV可通过直接或间接接触感染，发病动物通过粪、尿、呕吐物、唾液等排泻物和分泌物排毒，污染环境、器具、饲料等，引起直接和间接传染，常呈地方性流行，其病死率一般为60％～70％，最高可达90％以上(幼兽死亡率可达100％)，危害极为严重。

猫瘟热是猫科动物疾病预防的重点，目前，国内外均采用疫苗免疫注射来预防该病的发生。由于还没有针对病毒性疫病的特效药物，对于发病的动物，临床上主要采用对症治疗或用抗生素来预防并发症的发生，疗效并不显著。因此，开发一种针对猫瘟热特异性好，防治效果显著的预防治疗制剂，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种防治猫瘟热的特异性卵黄抗体及其制备方法，以缓解FPV缺乏特效药物、疗效不佳等现状。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

防治猫瘟热的特异性卵黄抗体，以FPV灭活苗和FPV亚单位疫苗为免疫原，通过免疫蛋鸡制得。

上述防治猫瘟热的特异性卵黄抗体，以FPV灭活苗为基础免疫原，以FPV亚单位疫苗为加强免疫原，通过先后免疫蛋鸡制得。

上述防治猫瘟热的特异性卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)免疫原制备

灭活FPV-GX01病毒(猫细小病毒GX01株)，加入胸腺肽至终浓度为0.3mg/mL，然后将其与白油佐剂按照体积比1∶2(V/V)充分乳化制备FPV灭活苗；将FPV-VLPs(猫细小病毒样粒子)与ISA206佐剂按照体积比1∶1(V/V)充分乳化制备FPV亚单位疫苗；

(2)蛋鸡免疫

利用FPV灭活苗、FPV亚单位疫苗先后免疫注射蛋鸡，收集鸡蛋，测定卵黄液中FPV特异抗体效价，当卵黄液血凝抑制效价≥1∶32～64，大量收集高免蛋；

(3)卵黄抗体分离纯化

将获得的高免蛋用辛酸法分离和纯化FPV卵黄抗体。

步骤(1)中FPV-VLPs是经过昆虫细胞密码子偏好优化的FPV-VP2基因在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中表达形成的，并且其血凝效价≥1∶2⁹。

优化的FPV VP2基因具有序列表SEQ.ID.No.1的碱基序列，其编码的VP2蛋白具有序列表SEQ.ID.No.2的氨基酸序列

步骤(2)中免疫注射的程序为：先用FPV灭活苗进行基础免疫注射1次，免疫剂量为0.2-1mL/只，于免疫后14d、28d改用FPV亚单位疫苗进行2次加强免疫，免疫剂量分别为0.4-2mL/只、0.6-3mL/只；若卵黄液FPV血凝抑制效价低于1∶32时，进行再一次加强免疫。