[发明专利]一种提取富含果胶类多糖植物DNA的试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种提取富含果胶类多糖植物DNA的试剂盒及方法，试剂盒的组份包括：去糖缓冲液、裂解液、抽提液、过柱缓冲液、去蛋白液、漂洗液、洗脱液和DNA吸附柱；提取方法是先进行植物中多糖的去除，再进行DNA提取，并且后续的抽提和过柱步骤可以再次去除多糖，使得提取的DNA质量高，不含杂质。本发明适合富含多糖、多酚等大量次生代谢物的植物基因组DNA的提取；本发明具有成本低、操作简便快捷、高质高效、适用性广等特点。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种提取富含果胶类多糖植物DNA的试剂盒及方法。

背景技术

在分子生物学实验中，从细胞中分离提取的DNA质量对于许多后续分子生物学实验至关重要，例如，限制性酶切分析、Southern印迹、DNA文库的构建等实验的成败在很大程度上取决于DNA的质量，而提取方法是影响DNA质量的一个重要因素。目前，在植物基因组DNA的提取中，最常用的方法是经典的CTAB(Cetyl-trimethyl-ammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵)法、SDS(Sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠)法，但这些方法通常只适用于含多糖多酚等次生物质较低的植物。由于不同物种以及同一物种不同组织所含内含物的差异，导致其DNA提取难易程度不同。比如对于富含多糖、多酚类物质的顽拗植物（如西南桦、黄秋葵），利用这些常规操作则很难获得高质量的DNA，甚至无法获得DNA。

曾杰等(2002)以西南桦为例发展了一种顽拗植物DNA制备方案。此方案首先用不含裂解液的Tris-HCl缓冲液洗去细胞匀浆中大部分多糖和其他次生物质。近年来，此法在其它顽拗植物基因组DNA提取中得以借鉴和参考。如黄捷等(2008)在提取黄秋葵基因组DNA时，采用不含CTAB的缓冲液除去大部分的多糖，随后采用两步沉淀法，即先用异丙醇沉淀，再用乙醇沉淀，去除剩余的多糖。此法操作步骤繁琐，耗时秏力，难以适应科研快速发展的需求。黄秋葵是含果胶类多糖极高的顽拗植物。Manoj-Kumar A等(2012)报道了一种改良的CTAB法结合果胶酶消化果胶，提取黄秋葵基因组DNA的方法。此法虽能获得高质量的DNA,但也存在操作步骤繁琐、耗时长，实验成本高等缺点。

常规的CTAB法和SDS法在用异丙醇或无水乙醇沉淀DNA时，果胶类多糖会与DNA 结合形成复合物，一起被沉淀，使得DNA包埋其中而难以溶解，或溶解后产生黏稠状的溶液。使用常规试剂盒时，大量的多糖会堵塞吸附柱，提取的DNA量极低，甚至不能获得DNA。因此，采用现有技术难于从富含果胶类多糖的植物中获得高质高量的基因组DNA。

发明内容

鉴于此，本发明为了解决上述存在之不足，提供一种提取富含果胶类多糖植物DNA的试剂盒及方法，主要对富含多糖、多酚以及其他大量次生代谢物的植物DNA进行高效提取，使得提取的DNA质量高。本发明具有成本低、操作简便快捷、高质高效、适用性广等特点。

本发明的发明人通过长期的探索尝试以及多次的实验和努力，不断改革与创新，为解决以上技术问题，所采用的具体技术方案是提供一种提取富含果胶类多糖植物DNA的试剂盒及方法。

本发明首先提供了一种提取富含果胶类多糖植物DNA的试剂盒，其组成包括：

去糖缓冲液：Tris-HCl，NaCl，EDTA，β-巯基乙醇；

裂解液：CTAB，Tris-HCl，EDTA，NaCl，β-巯基乙醇；

抽提液：氯仿，异戊醇；

过柱缓冲液：盐酸胍，Tris-HCl，EDTA；

去蛋白液：盐酸胍，Tris-HCl，乙醇；

漂洗液：NaCl，Tris-HCl，乙醇；

洗脱液：Tris-HCl，EDTA；

DNA吸附柱。