[发明专利]一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒

权利要求书

1.一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒，包括裂解部分、吸附部分、漂洗部分和洗脱部分，其特征在于，所述裂解部分包括离心管及配套的提篮，在提篮的底部设有滤膜，该滤膜在不离心的情况下依靠张力阻挡水分渗透；所述吸附部分包括结合缓冲液、硅类介质微球悬浮液、吸附增强剂，硅类介质微球的表面至少含有硅羟基，吸附增强剂的溶剂为水，溶质包括：质量浓度3～10％质子或非质子溶剂，80～120μg/mL外源添加的DNA短片段扩增产物；所述洗脱部分包括高效洗脱液，高效洗脱液的溶剂为水，溶质包括：5～20mM的Tris-HCl、0.5～2mM螯合剂、0.1～5mM多价阴离子，pH 8.0～9.0。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解部分还包括裂解液，裂解液的溶剂为水，溶质包括：5～50mM的Tris-HCl、0.5～3wt％表面活性剂、0.5～20mM螯合剂、0.5～1.5M盐酸胍、50～120mM的氯化钠和0.5～3mg/mL的蛋白酶K，pH 7.2～8.5。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述结合缓冲液的溶剂为水，溶质包括：40～150mM的Tris-HCl、1～5wt％表面活性剂、5～6M的离液剂、10～50mM螯合剂和体积浓度20～35％的醇含量，pH 5.2～6.0。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述离液剂选自盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钾、硫氰酸钾、高氯酸钠、氯化锂或其组合。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述硅类介质微球悬浮液包括分散液和硅类介质微球，分散液为水，硅类介质微球为硅珠、磁珠、硅藻泥或玻璃奶。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述硅类介质微球悬浮液含质量分数6％的微球，粒径1～10μm，该微球经酸化预处理，其pH值小于5。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述吸附增强剂中，外源添加的DNA短片段扩增产物是经如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示一对引物扩增获得，片段长度在100-200bp区间内。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述吸附增强剂中的质子或非质子溶剂为N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述高效洗脱液中的多价阴离子为柠檬酸根离子、酒石酸根离子、磷酸根离子、硝酸根离子、硫酸根离子或盐酸根离子中的任一种。

10.一种利用权利要求1～9中任一项所述试剂盒进行超微量DNA提取的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)检材准备：取一根湿棉签擦拭凶器表面潜在斑迹后另取一根干棉签再次擦拭，将棉签头折断转移到离心提篮中，提篮置于配套离心管中，并编号记录；

(2)细胞裂解：往检材中加入裂解液，混匀，金属干浴或水浴56℃加热30分钟，上机离心弃提篮，留下离心管及其中的裂解产物至下一步；

(3)DNA吸附：向离心管中加入结合缓冲液和硅珠悬浮液，混匀后加入吸附增强剂，混匀常温静置吸附；

(4)漂洗除盐：吸附结束后离心，弃尽上清液，加入漂洗液震荡混匀，充分去除盐份和杂质；

(5)洗脱：将漂洗液经离心弃尽后离心管室温晾干，挥发残留的醇，加入洗脱液，震荡混匀后洗脱，吸出扩增或-20℃保存。