[发明专利]一种鉴定美洲大蠊用引物对、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种鉴定美洲大蠊用引物对、试剂盒及其应用，涉及药材鉴定技术领域。本发明所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。利用本发明的引物对或试剂盒鉴定美洲大蠊操作简单，样品限制性低，检测特异性高，稳定性好，实用性广。针对不同来源的美洲大蠊样品，无论是鲜品或干品、昆虫药材炮制品或粉末状样品、全虫或部分虫体、幼虫或成虫都具有98％以上的准确度和精确度。

技术领域

本发明属于药材鉴定领域，具体涉及一种鉴定美洲大蠊用引物对、试剂盒及其应用。

背景技术

美洲大蠊(Periplaneta americana Linn.)是长期应用于民间的动物药药材，常以干燥或鲜成虫入药，主治儿童疳积、扁桃腺炎、身体包块、痈疮肿痛和蜈蚣叮咬等。近年来研究表明，美洲大蠊作为昆虫药物，临床应用记录显示其具有抗肿瘤、治疗心血管疾病、促进组织修复、抗菌、抗病毒、抗氧化、增强免疫等药理作用，其药物制剂在临床上的应用也越来越广泛，而对美洲大蠊药材的真伪鉴定是入药及进行药理学研究的基础。目前在国际范围内对昆虫的种类鉴定主要是依据成虫的形态学特征，而在我国的药材市场，美洲大蠊药材通常以粉末或炮制品等形式入药。由于传统的性状鉴别缺乏准确的内部解剖特征或者是在贮藏、加工炮制过程中形态被严重破坏，因此基于形态结构细微差别的归类描述稳定性差、可信度低，导致药用美洲大蠊的鉴定存在很大困难。

由于传统的性状鉴别方法无法准确、快速的鉴定药材市场贩售的美洲大蠊药材，导致有部分伪品(例如药效不及美洲大蠊的澳洲大蠊、德国小蠊、甚或其它科属的昆虫)在市场内流通，市场较为混乱。因此，该昆虫药物的药材鉴定及原料药饮片的质量控制等均亟需寻求一种新的方法，以弥补传统分类学方法的缺陷及不足。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鉴定美洲大蠊用引物对、试剂盒及其应用，实现美洲大蠊作为昆虫原料药材的快速鉴定，可缩短鉴定时间，提高鉴定结果的准确性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种鉴定美洲大蠊用引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3所示。

本发明提供了一种鉴定美洲大蠊用试剂盒，包含上述引物对，还包括PCR Buffer。

优选的，所述PCR Buffer包括：0.1U的Taq聚合酶、500μmol/L的dNTP、20mmol/L的Tris-HCl、100mmol/L的KCl和3μmol/L的MgCl₂。

本发明还提供了上述引物对或上述试剂盒在鉴定美洲大蠊中的应用。

优选的，所述鉴定包括以下步骤：1)提取样品基因组DNA，得模板DNA；2)将引物对、PCRBuffer和步骤1)得到的所述模板DNA混合后进行PCR扩增，得扩增产物；3)将步骤2)得到的所述扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，当所述扩增产物的大小为705bp，所述样品为美洲大蠊。

优选的，所述样品包括鲜品或干品。

优选的，所述样品包括幼虫或成虫的全虫或部分虫体。

优选的，每50μL所述PCR扩增的反应体系包括：蒸馏水19μL，PCR Buffer 25μL，引物各2μL和模板DNA2μL。

优选的，所述PCR扩增的反应程序包括：94℃预变性3.5min；94℃35s，49℃35s，72℃45s，33个循环；72℃延伸5分钟。

本发明提供了一种鉴定美洲大蠊用引物对、试剂盒及其应用，可实现美洲大蠊作为昆虫原料药材的快速鉴定，缩短鉴定时间，提高鉴定结果的准确性。在本发明实施例中，鉴定准确度达98％以上。

附图说明

图1为本发明实施例3的琼脂糖凝胶电泳图；