[发明专利]一种诱导樱桃番茄花药获得再生植株的培养方法

权利要求书

1.一种诱导樱桃番茄花药获得再生植株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）花蕾取材

在樱桃番茄盛花期于晴天上午9:00-11:00取材，采集长度为0.7-0.9cm的花蕾，用冰盒带回实验室，筛选出小孢子处于单核靠边期的花蕾备用；

（2）花蕾预处理

将上述筛选出的花蕾置于密闭容器内于4℃放置1-3d，然后进行表面消毒，得到预处理后的花蕾；

（3）花药胁迫处理

将花药从预处理后的花蕾中完整剥离、取出，去除花丝后腹面向下接种在诱导培养基上，于33-35℃黑暗条件下培养2-4d，得到胁迫处理后的花药；

（4）花药胚状体诱导培养

将上述接种了花药的诱导培养基置于温度24-26℃、黑暗条件下培养28-36d，可得到由裂开的花药壁内萌发出的胚状体；再将其置于温度24-26℃、光照强度1000-1500 Lx的条件下培养8-15d，胚状体转绿后可发育成幼芽；

（5）壮苗生根培养

待上述幼芽生长到高度大于0.5cm时，将其转接至壮苗生根培养基中，置于温度23-27℃、光照强度2000-3000 Lx的条件下培养20-30d，幼芽长大成苗，继续培养35-45d得到再生植株。

2.根据权利要求1所述的一种诱导樱桃番茄花药获得再生植株的培养方法，其特征在于，所述步骤（1）中筛选花蕾的方法为：挑取采集的花蕾中的花药2~4枚，置于载玻片上碾碎，释放出花粉，用醋酸洋红染色压片法镜检鉴定花粉发育时期，筛选出花粉小孢子处于单核靠边期的花蕾。

3.根据权利要求1所述的一种诱导樱桃番茄花药获得再生植株的培养方法，其特征在于，所述步骤（2）中花蕾表面消毒的方法为：先将花蕾用洗衣粉清洗干净，流水冲洗20-30min；然后依次用70%乙醇浸泡30s，2.0%次氯酸钠溶液加2-3滴吐温80浸泡20min，最后用无菌水冲洗3-4次。

4.根据权利要求1所述的一种诱导樱桃番茄花药获得再生植株的培养方法，其特征在于，所述步骤（3）和（4）中诱导培养基的配方为：KNO₃ 2100~2400mg/L，（NH₄）₂ SO₄ 125~135mg/L，KH₂PO₄ 220~240mg/L，MgSO₄·7H₂O 230~250mg/L，CaCl₂·2H₂O 114~120mg/L，MnSO₄·4H₂O 9~11mg/L，ZnSO₄·7H₂O 3.6~4.0mg/L，H₃BO₃ 2.3~2.7mg/L，KI 0.9~1.1mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25~0.29mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.024~0.026mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.024~0.026mg/L ，Fe-Na₂EDTA 32.8~34.4mg/L，肌醇85~95mg/L，烟酸2.2~2.6mg/L，L-天冬素2.6~3.2mg/L，维生素B1 0.8~1.2mg/L，维生素B6 0.4~0.6mg/L，二硫基丙醇0.2~0.5mg/L，蔗糖36~40g/L，甘露醇21~25g/L，5-溴尿嘧啶2.7~3.3mg/L，硅酸钠15~18mg/L，硝酸铈0.04~0.06mg/L，GA₃ 0.8~1.2mg/L，苯肽胺酸0.6~1.0mg/L，香蕉泥26~32g/L，水杨酸0.1~0.3mmol/L，海藻酸钾0.35~0.40 g/L，结冷胶2~4g/L，pH值为5.6~6.0。