[发明专利]一种鉴定美洲大蠊用引物对、试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201811022490.X | 申请日： | 2018-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN108950023A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 耿福能;张成桂;沈咏梅;陈壮志;刘彬;李贵轲;马秀英;魏永凯 | 申请（专利权）人： | 大理大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 671000 云南省*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 美洲大蠊 引物 试剂盒 种鉴定 粉末状样品 核苷酸序列 准确度 成虫 药材鉴定 药材炮制 幼虫 虫体 干品 全虫 鲜品 昆虫 应用 检测 | ||
1.一种鉴定美洲大蠊用引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
2.一种鉴定美洲大蠊用试剂盒，包含权利要求1所述引物对，还包括PCR Buffer。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述PCR Buffer包括：0.1U的Taq聚合酶、500μmol/L的dNTP、20mmol/L的Tris-HCl、100mmol/L的KCl和3μmol/L的MgCl2。
4.权利要求1所述引物对或权利要求2～3任一项所述试剂盒在鉴定美洲大蠊中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述鉴定包括以下步骤：1)提取样品基因组DNA，得模板DNA；2)将引物对、PCR Buffer和步骤1)得到的所述模板DNA混合后进行PCR扩增，得扩增产物；3)将步骤2)得到的所述扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，当所述扩增产物的大小为433bp，所述样品为美洲大蠊。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述样品包括鲜品或干品。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述样品包括幼虫或成虫的全虫或部分虫体。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，每50μL所述PCR扩增的反应体系包括：蒸馏水19μL，PCR Buffer 25μL，引物各2μL和模板DNA 2μL。
9.根据权利要求5或8所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序包括：94℃预变性3.5min；94℃35s，49℃35s，72℃45s，33个循环；72℃延伸5分钟。
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