[发明专利]一种动物毛发中阿奇霉素残留量的检测方法

说明书

本发明属于药物残留检测技术领域，具体涉及一种动物毛发中阿奇霉素残留量的检测方法。该方法以动物毛发为检测对象，无需宰杀鸡、猪、牛等畜禽，实现畜禽活体检测；毛发样品较肌肉、肝脏，粪便等获取方便，且由于毛发生长周期长，更能准确监控畜禽生长过程是否使用阿奇霉素，从而实现畜禽等食品安全生产监管目的，检测结果准确，不会出现假阳性、假阴性等情况，灵敏度高。

技术领域

本发明属于药物残留检测技术领域，具体涉及一种动物毛发中阿奇霉素残留量的检测方法。

背景技术

阿奇霉素(azithromycin，AZM)是新一代大环内酯类抗生素，通过抑制蛋白质的合成起作用，临床上用于人上下呼吸道、泌尿道、皮肤及软组织感染和性传播疾病的预防和治疗。因其具有抗菌谱广、半衰期长、在酸性环境中稳定等特点而备受关注，我国地方兽药标准2004年曾收录该药,农业部则在2005年底将其列入禁用兽药名单。

阿奇霉素违规用于畜禽养殖，会影响畜禽疫病防治和畜禽产品安全、增加细菌产生耐药性的风险、威胁人类健康。虽然国家明令禁止，但养殖环节会带来经济效益受损，因此养殖户仍将抗生素添加于饲料中或通过其他途径使用，从而导致人用抗生素仍被滥用于畜禽，成为威胁畜禽产品安全的新隐患。

国内外学者已开展部分基质中阿奇霉素的检测技术研究，但是尚未颁布任何基质中有关阿奇霉素的检测标准。研究较多的检测方法有紫外检测法、荧光检测法和同位素内标法，但是采用紫外检测器的方法，吸收弱灵敏度极低；采用荧光检测器的方法，需要衍生，测定耗时；而采用同位素内标法，高效液相色谱-串联质谱法检测，方法快速、简便、专属性强，灵敏度高，是目前研究中比较推崇的一种检测方法。

目前，畜禽产品中阿奇霉素检测的基质主要是肌肉、肝脏、血液和粪便，而肌肉和肝脏需要宰杀活体动物取得，畜禽血液样品需要专业人员取得，而且在检测前需要冷链保存，防止变质；粪便易受污染，取样也不方便。此外，在休药期后，这些基质中的药物残留难于被检测出来。而毛发因为其结构成分特点和较低的代谢活性，使得药物进入后代谢缓慢，可长期蓄积保留，在畜禽毛发发中具有较长残留时间，而且毛发取样、运输方便，相比肌肉、肝脏、血液和粪便基质更适合作为检测样本为禽产品安全生产中违禁药物监管提供更可靠确证依据。目前尚未见畜禽毛发中阿奇霉素残留量检测方法。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的畜禽产品中阿奇霉素检测结果不可靠，不利于畜禽产品安全监管，检测样品不易得或难于保存等缺陷，从而提供一种动物毛发中阿奇霉素残留量的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种动物毛发中阿奇霉素残留量的检测方法，包括以下步骤：

1.供试品溶液的制备

取毛发样品于二层医用纱布中，清洗，剪碎，与阿奇霉素-D3工作液混合，然后加入甲酸与甲醇混合溶液，室温超声30～60min，获得毛发提取液，过滤，吹干，乙酸缓冲液溶解残渣，聚二乙烯苯磺酸-乙烯基吡咯烷酮(MCX)修饰Fe₃O₄纳米材料磁固相萃取，氨化甲醇洗脱，吹干，用1mL甲醇水溶液(1:1,v/v)溶解残渣，过滤膜，作为供试品溶液；

2.高效液相色谱-串联质谱法检测

高效液相色谱条件：色谱柱：C18，2.1mm×100mm，1.8μm；流动相A为体积浓度为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇，流速：0.4mL/min；柱温：35℃；进样量：10μL；梯度洗脱程序：0～2min，2％B线性变化至40％B；2～3min，保持40％B，3～4min，40％B线性变化至75％B；4-5min，保持75％B，5～5.1min，75％B线性变化至98％B；5.1-6min，保持98％B；6-6.1min98％降为2％B；6.1～7.0min,维持2％B；