[发明专利]一种冷水溶性黄芪多糖及其制备方法及其体外抗肿瘤应用

说明书

本发明涉及一种冷水溶性黄芪多糖及其制备方法及其体外抗肿瘤应用，冷水溶性黄芪多糖为α‑吡喃型葡聚糖，其组成为：鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，各组分摩尔比为0.28:0.62:0.96:1.00:12.10:1.70，分子量为1.61×10⁶Da。该多糖是以黄芪为原料，在4℃条件下用水提取得到。本发明冷水溶性黄芪多糖对MGC803人胃癌细胞展现了较强的抑制活性，其抑制率相比于热水提黄芪多糖高出一倍以上，且当其浓度为400μg/mL时，相当于50μg/mL的化疗药物5‑Fu的作用效果。

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物领域，涉及黄芪多糖，尤其是一种冷水溶性黄芪多糖制备方法及其体外抗肿瘤应用。

背景技术

在中国，黄芪是一种非常珍贵的药材，富含多种生物活性物质，如多糖、黄酮等。传统的多糖提取方法是热水或弱碱性提取，乙醇沉淀。如专利CN105777921A公开了一种黄芪多糖提取工艺，原料黄芪经挑、洗、润、切等预处理后，投入到8-12倍量的蒸馏水中，温度升高至45-50℃，调节pH 5.5-7.0，加入纤维素酶和木瓜蛋白酶的混合酶制剂水解2-3h；随后，加入氢氧化钙溶液，调节溶液pH值为9.0-10.0，升温至75℃，维持60-100min后，自然冷却至50℃，过滤除渣，得滤液I，备用；收集上述残渣，投入6-8倍量的蒸馏水中，温度升高至50-60℃，调节pH在5.5-7.0，加入酶制剂水解2-3h，随后加入氢氧化钙溶液，调节溶液 pH值至9.0-10.0，升温维持在75℃，保持40-60min后，自然冷却至50℃，过滤除渣，得滤液II-1；再次收集残渣，重复上述操作，得到滤液II-2；合并滤液I、II-1和II-2。将合并后的滤液置于真空浓缩机中，减压浓缩至原液体积的70％；向浓缩液中缓慢加入95％乙醇至乙醇终浓度为70％，静置沉降8-12h，机械过滤，获得的沉析物即为黄芪多糖，再用95％乙醇洗涤1-2次；将洗涤后的黄芪多糖沉析物进行冷冻干燥，粉碎后，过100目筛，即得黄芪多糖提取物，其工艺条件温和，所得黄芪多糖提取物纯度高、生物活性好，作为一种药品的原料药，可用于增强机体免疫功能、杀菌抗病毒、抗肿瘤、抗骨质疏松、抗溃疡和调节血压等。

关于黄芪多糖提取技术的现代研究主要集中在增加黄芪多糖的得率上，且通常与化疗药物顺铂等联用以达到抗肿瘤的功效。

然而，相比于这些现代提取技术，很少有人研究4℃条件提取对黄芪多糖结构和活性的保护作用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种冷水溶性黄芪多糖的制备方法，该制备方法提取条件温和，有效保护了多糖结构不被破坏，进而维持多糖较强的抗肿瘤活性，为以后天然活性成分在药品和食品行业的应用提供了良好的基础。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

一种冷水溶性黄芪多糖，为α-吡喃型葡聚糖，其组成为：鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，各组分摩尔比为0.28:0.62:0.96:1.00:12.10:1.70，分子量为1.61×10⁶Da。

该多糖的制备方法为：

(1)以蒙古黄芪为原料，向洗净、晾干的黄芪原料500g中加入5L蒸馏水，于4℃条件下浸泡6h，抽滤后得浸提液；对抽滤后的残渣采用相同条件再提取一次，合并两次得到的浸提液，并利用冻融法进行浓缩，50％乙醇沉淀过夜，3500r/min离心15min，沉淀加蒸馏水复溶，采用冻融除蛋白最终获得黄芪粗多糖。

(2)对(1)中获得的粗多糖采用低温条件过G-200葡聚糖凝胶柱，最终分离得到了一种新型的冷水溶性黄芪多糖，其分子量为1.61×10⁶Da。

本发明同时保护该冷水溶性黄芪多糖在抗肿瘤药物中的应用。