[发明专利]一种荧光染料与电泳PCR双用缓冲液

说明书

本发明公开了一种荧光染料与电泳PCR双用缓冲液，包括以下各组分：甲酚红钠(1.5～2.5)*10^‑5g/L、PCR Buffer 71～75％、dNTP 5.5～6.5％、甘油4～5％、SYBR Green Ⅰ 0.008～0.015％和灭菌去离子水15～20％。本发明的双用染剂的具有不同检测平台的通用性，可适用不同厂牌Taq酶，至少确认可用于Invitrogen、Promega、Bioer Taq与pfu Taq，可同时用于Syber green I real‑time PCR扩增或一般PCR扩增，并且荧光PCR扩增反应后可直接进行琼脂糖电泳执行产物回收或判读，不需额外加入染色剂即可电泳，荧光PCR检测后仍可进行电泳检测，不需额外加入染色剂。缓冲液配方可以简化电泳操作时需要与染料稀释与加入核酸染剂的两个过程，特别是省略传统核酸染料EtBr等致癌物，大大增加试验的安全性。

技术领域

本发明分子试验技术领域，具体涉及一种荧光染料与电泳PCR双用缓冲液。

背景技术

PCR反应中加入缓冲液有助于酶的稳定，能提供聚合酶活力需要的离子和合适的酸碱度，给PCR反应提供一个最适合酶催化反应的条件。传统的Real time PCR中使用的缓冲液中，一般不添加甘油与甲酚红钠。通常认为甲酚红钠会吸收Syber green I发散荧光，使荧光值下降，而甘油的加入会引起溶液密度加大影响荧光值。当缓冲液中存在Sybergreen I时，电泳时会因为PCR反应液密度对比电泳使用的缓冲液密度小，在加入反应液时会使飘起来，无法上样，而且由于上样时由于电泳缓冲液与PCR反应液都为无色透明液体，导致上样困难，一般现在的电泳方法需要将PCR反应液与染料(含增加密度的溶液)稀释混合方能顺利上样。

当Real time PCR所使用的Syber green I浓度较低时，电泳时若没有将核酸染料加入琼脂糖凝胶或电泳后复染过程无法顺利判读PCR扩增条带。

发明内容

本发明要解决的技术问题是传统的Real time PCR中使用的缓冲液一般不添加染色剂，电泳时前需要混入染料的缺陷，提供一种及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

本发明所达到的有益效果是：

一种荧光染料与电泳PCR双用缓冲液，包括以下各组分：

甲酚红钠(1.5～2.5)*10^-5g/L

PCR Buffer 71～75％

dNTP 5.5～6.5％

甘油4～5％

SYBR Green Ⅰ0.008～0.015％

灭菌去离子水15～20％。

优选的，所述的荧光染料与电泳PCR双用缓冲液，包括以下各组分：

甲酚红钠2.5*10^-5g/L

PCR Buffer 71.5％

dNTP 5.7％

甘油4.3％

SYBR Green Ⅰ0.01％

灭菌去离子水17.9％。