[发明专利]一种检测少量样品全基因组DNA甲基化的方法在审
| 申请号： | 201811024725.9 | 申请日： | 2018-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109097439A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 赵小东;康亚妮;邵志峰;胡丛霞 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6804 | 分类号： | C12Q1/6804 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;马莉华 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲基化 核酸片段 全基因组DNA 第二混合物 第一混合物 种检测 甲基化核酸 普遍适用性 特异性抗体 特异性引物 测序分析 辅助核酸 扩增产物 单链DNA 双链DNA 热变性 扩增 捕获 | ||
1.一种检测全基因组DNA甲基化的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)提供DNA片段，所述DNA片段包括源自细胞基因组DNA；
(b)在所述DNA片段两端添加接头，得到末端带有接头的DNA；
(c)向所述末端带有接头的DNA片段中加入辅助核酸片段，形成第一混合物；
(d)将所述第一混合物进行热变性，使第一混合物中的双链DNA成为单链DNA，从而形成第二混合物；
(e)用特异性抗体对所述第二混合物中甲基化的DNA片段进行捕获；
(f)用特异性引物对被捕获的DNA片段进行扩增，从而获得对应于甲基化的DNA片段的扩增产物；
(g)对所述扩增产物进行检测，从而获得全基因组DNA甲基化的检测结果。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(g)中，包括：对所述扩增产物进行建库，然后进行检测。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述DNA片段来自20-10000个细胞，较佳地，50-2000个细胞。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辅助核酸片段包括甲基化或非甲基化的辅助核酸片段。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辅助核酸片段的长度为200-4000bp，较佳地，500-3000bp，更佳地，1000-2500bp。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辅助核酸片段的量为5-250ng，较佳地，15-150ng，更佳地，25-100ng。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的DNA片段与所述辅助核酸片段的质量比为1:5-1:10000，较佳地1:20-1:5000，更佳地1:50-1:2000。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体的含量为0.5-15ug，较佳地，1-10ug。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体与第二混合物的比例为10-300:1-2-50：1，较佳地，30-200：1-5-30：1，更佳地，50-150：1-8-20:1。
10.一种辅助核酸片段的用途，其特征在于，用于制备构建微量核酸样品文库的试剂。
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