[发明专利]一种用于长期保存太平洋真宽水蚤休眠卵的冻干冷藏法

说明书

本发明公开了一种包含二甲基亚砜、马来酸和透明质酸钠的保护剂。本发明还公开了一种用于长期保存太平洋真宽水蚤休眠卵的冻干冷藏法，该方法为：将休眠卵过筛并清洗干净后，移至盛放有保护剂的容器内，再通入由惰性化学干燥剂干燥后的循环氮气干燥，待卵粒干燥后，转移至避光容器中，密封保存即可。本发明提供的保护剂能保持太平洋真宽水蚤休眠卵基质的完整性，减弱休眠卵组织结构的损伤，保持休眠卵的高活性，增加休眠卵的孵化萌发率；提供的一种用于长期保存太平洋真宽水蚤休眠卵的冻干冷藏法，技术操作简单，具有可重复性，成本低廉，安全可靠，体系稳定干燥，环境无菌化，能延长休眠卵成活率，达到大量、长期储存休眠卵的目的。

技术领域

本发明涉及水产生物技术领域，尤其是涉及一种用于长期保存太平洋真宽水蚤休眠卵的冻干冷藏法。

技术背景

桡足类，隶属于节肢动物门、甲壳纲、桡足亚纲，是浮游动物的重要组成部分，为小型甲壳动物，体长3mm，营浮游与寄生生活，分布于海洋、淡水或半咸水中。因其是大多数鱼类幼体的开口饵料之一，故在水生态系统食物网和水产养殖中具有重要意义。太平洋真宽水蚤隶属于哲水蚤目、宽水蚤科、真宽水蚤属，是低盐区十分常见的暖水性沿岸桡足类物种之一。太平洋真宽水蚤主要出现在夏秋季，到秋末开始产休眠卵，休眠卵沉入海底被埋入海泥并间续孵化以补充种群，休眠卵结构独特，可以长期处于休眠状态，是卵粒储存很好的阶段。

桡足类是水域生态系统的关键类群，在物质循环、能量流动和信息传递中起着重要作用。休眠卵是桡足类的重要生存策略，在抵抗不利环境、维持种群延续等方面起着重要作用，对桡足类种群的季节动态和物种延续具有十分重要的意义。休眠卵是桡足类在不良环境条件下进行有性生殖延续后代的产物，休眠卵具有抵抗外界不良环境、易于扩散和通过重组产生遗传多样性等特点，也是浮游动物集约化培养的重要种源，通过桡足类快速的孤雌生殖在短时间内大量繁殖，使得桡足类作为鲜活饵料为水产经济动物的苗种生产起到极其重要的作用。

休眠卵的产生、诱导休眠卵的形成以及休眠卵的适时孵化利用也是水产养殖业中非常有意义的课题。桡足类因其体内富含某些必需脂肪酸，特别是EPA和DHA，在水产育苗上有很多应用，常常被用来作为一些经济鱼类的开口饵料。随着研究的深入和科学技术的发展，通过桡足类休眠卵获得大量无节幼体逐渐被人们重视和利用，休眠卵的规模培养将在现代海水养殖中发挥重要作用，具有广阔的应用前景。

目前，将休眠卵应用于水产养殖业还有很多困难，比如，对休眠卵的保存、孵化等方面的研究还不够，无法按照规模生产的需求对其进行控制，而育苗池中过早从休眠卵萌发的桡足类易捕食经济动物幼体等。因此，深入研究桡足类休眠卵生态学对于海水养殖业具有重要意义，而如何大量、长期储存休眠卵是一个亟待解决的难题。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种能保持休眠卵基质完整性，减弱休眠卵组织结构损伤，保持休眠卵的高活性，增加休眠卵孵化萌发率的保护剂。

本发明的目的之二在于提供一种技术操作简单，具有可重复性，成本低廉，安全可靠，体系稳定干燥，环境无菌化，能延长休眠卵成活率的用于长期保存太平洋真宽水蚤休眠卵的冻干冷藏法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种保护剂，其中包含二甲基亚砜、马来酸和透明质酸钠。该保护剂能够保持休眠卵细胞中基质的完整性，并且减弱低温对休眠卵组织结构的损伤，以此保持休眠卵的高活性，增加休眠卵的孵化萌发率。

为了达到最佳技术方案，保护剂中马来酸的重量占比为0.055～0.075％，透明质酸钠和马来酸的重量比为1.2～1.5:0.6。在进行休眠卵的冻干冷藏时，加入上述休眠卵保护剂，其中马来酸和透明质酸钠之间由配糖键和不饱和键相互交结，利用高粘结性和二甲基亚砜的高渗透性，进入休眠卵内部，并形成一定的渗透压，使得基质纤维连接蛋白富集在休眠卵外部的质膜上，间质胶原纤维的重新排列减缓，从而保持了休眠卵中基质的完整性，减弱了低温氮气对休眠卵组织结构的损伤，使得休眠卵在冻存期间能尽可能的保持活性，增加其孵化萌发率。