[发明专利]一种抗TK1原核重组单链抗体及制备方法

说明书

本发明公开了单链抗体、单克隆抗体及其制备方法和应用。其中，该单链抗体含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。该抗TK1单链抗体的免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体地，涉及单链抗体、单克隆抗体及其制备方法和应用，更具体地，涉及单克隆抗体、分离的核酸、载体、重组细胞、制备单克隆抗体的方法、免疫偶联物、检测条或检测试剂盒，以及单克隆抗体、免疫偶联物和检测条或检测试剂盒在检测细胞异常增殖的用途。

背景技术

人胸苷激酶1(Human Thymidine Kinase,hTK1)是人细胞增殖过程中DNA合成过程中的一种关键酶，与细胞异常增值速率相关。其蛋白单体分子由234个氨基酸组成，活性型式为由4个单体组成的四聚体。目前已经有大量研究指出，检测人血清hTK1含量可以预测发生早期肿瘤的发生风险，为肿瘤早发现早治疗提供有效辅助手段。

目前抗TK1单克隆抗体大多特异性差，而特异性和灵敏度较好的鸡抗TK1多克隆抗体因为制备周期长，纯化困难，一直限制着hTK1在人群中大量检测应用。

由此，抗TK1单克隆抗体有待研究。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种单克隆抗体，该单克隆抗体为抗TK1单克隆抗体，该单克隆抗体的免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：

发明人通过其之前研究筛选得到的一株鸡源抗TK1重组单链抗体基因序列(具有SEQ ID NO：3所示序列)，进行密码子优化以及加入SBP-tag后，得到了SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，并通过构建重组pET22b表达载体，在BL21(DE3)在细胞周质间隙表达可溶性的单链抗体蛋白，并通过TK1-31aa偶联多肽抗原的琼脂糖凝胶柱亲和层析提取纯化，制备得到高纯度的、高活性的、高特异性的重组抗TK1单链抗体蛋白。其中，SEQ ID NO：3所示序列如下：

GCAGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCGATTATGGCATGAACTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAGTTCGTCGCTGGTATTGAGAATGATGGTAGTAGCACATGGTACGCGACGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTTCTGCGCCAAAGATTTTAGTAGTGGTTATGGTGGTTGGAGTGCTTCTGGTGGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCTGGTGGAGGATCAGGTGGAGGAGGATCCGGAGGTGGTGGTTCTGGAGGTGGTTCTGCGCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGATCGGAGCAGCTACTATGGTTACTATGGCTGGTATCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTCTCACTGTGATCTATTACAGCAGCAACAGACCCACGAACATCCCTTCACGATTCTCTGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGGAGTGCAGAAGACAGCAGCTATGCTGCTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTG

(SEQ ID NO：3)