[发明专利]一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途

说明书

本发明公开了一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途，其中弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体细胞株为杂交瘤细胞株T2，由中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国·武汉·武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2018115，保藏日期为2018年7月20日。本发明弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体由所述杂交瘤细胞株T2分泌产生，可用于制备检测弓形虫棒状体蛋白18抗原试剂。本发明通过细胞融合技术制备了一株鼠源的弓形虫棒状体蛋白ROP18单克隆抗体细胞株T2，该细胞株分泌的单克隆抗体经过间接竞争酶联免疫法筛选和抗原表位初步鉴定，为进一步的临床应用奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途，属于免疫检测技术领域。

背景技术

弓形虫是一种人兽间广为流行的胞内寄生原虫，其感染严重危害人类健康和畜牧业的发展。虽然弓形虫属下仅刚地弓形虫(T.gondii)一个虫种，但世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性Type1，Type2和Type3是流行于北美和欧洲的三个经典基因型，其在小鼠体内表现为强、中、弱不同的毒力特征，寻找与弓形虫基因型/虫株毒力相关的效应分子及其作用机制是近年本领域的研究热点。

弓形虫棒状体蛋白18(rhoptry protein 18，ROP18)是目前公认的与经典基因型弓形虫毒力相关的效应分子之一，该蛋白通过与宿主不同分子相互作用，帮助虫体逃脱机体的免疫清除并促进其在体内的增殖，同时也参与机体的不同发病环节，因而该蛋白已成为疾病诊断、疫苗研制和抗弓形虫药物重要的靶点。

和多克隆抗体相比，单克隆抗体具有高特异性、高均一性的特点。虽然ROP18已成为弓形虫研究领域的“明星分子”，但遗憾的是，迄今尚没有商业化的ROP18单克隆抗体问世，限制了对其分子作用机制和临床应用的进一步研究。

发明内容

本发明旨在提供一种弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体、分泌该抗体的细胞株及其用途。本发明以弓形虫棒状体蛋白ROP18为靶点，致力于研究其单克隆抗体，建立间接酶联免疫法筛选和抗原表位初步鉴定，为进一步研究奠定了基础。

本发明弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体细胞株，为杂交瘤细胞株T2，由中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国·武汉·武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2018115，保藏日期为2018年7月10日。

本发明弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体，由所述弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体细胞株分泌产生。

所述单克隆抗体的重链可变区CDR包括包括三个互补决定区CDR1～CDR3：CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

所述单克隆抗体的轻链可变区CDR包括三个互补决定区CDR1～CDR3：CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

本发明弓形虫棒状体蛋白ROP18的单克隆抗体的用途，是在制备检测弓形虫棒状体蛋白18抗原试剂中的应用。

本发明通过细胞融合技术制备了一株鼠源的弓形虫棒状体蛋白ROP18单克隆抗体细胞株T2，该细胞株分泌的单克隆抗体经过间接竞争酶联免疫法筛选和抗原表位初步鉴定，为进一步的临床应用奠定基础。

附图说明

图1为重组质粒双酶切鉴定。从图1中可以看出ROP18基因正确插入pET28a载体。

图2为pET28a-ROP18的优化表达。从图2中可以看出优化后的ROP18基因在原核载体高效表达。