[发明专利]一种人-15-羟基前列腺素脱氢酶过表达质粒的构建方法及其应用

说明书

一种人‑15‑羟基前列腺素脱氢酶过表达质粒的构建方法及其应用。该构建方法包括如下步骤：以SEQ ID No：4‑5为引物，GenBank登录号NC_3248的SEQ ID No：1为模板，进行PCR扩增，获得目的基因；用限制性内切酶Xba I和BamH I对PCR产物和pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP载体进行酶切、纯化、连接，转化至大肠杆菌，即得质粒。与现有技术相比，本发明提供的HPGD在宫颈癌组织中呈现低水平表达，人为过表达宫颈癌细胞的HPGD，能够明显抑制细胞的增殖、迁移能力及恶性程度，因此，HPGD在宫颈癌发病过程中发挥重要作用，可作为诊疗宫颈癌的新的分子标记和药物靶点。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种人-15-羟基前列腺素脱氢酶过表达质粒的构建方法及其应用。

背景技术

宫颈癌发病率及死亡率在全球女性癌症中分别位居第三及第四位(CA:a cancerjournal for clinicians.2015；65(2):87-108)。宫颈癌发生的早期常无任何症状，不易被察觉，而晚期则伴有不规则的阴道流血、骨盆痛、性交痛等症状(Vaccine.2012；30 Suppl5:F55-70；Public Health Genomics.2009；12(5-6):291-307.)。Harald zur Hausen及其同事在宫颈癌组织中首次检测到HPV16，从而揭示了子宫颈HPV感染与宫颈癌之间的因果联系，为此，Hausen在2008年被授予诺贝尔生理学或医学奖(International journal ofcancer.2012；131(10):2349-2359.)。流行病学上，高危型HPV的持续感染已被确定为宫颈癌发生的关键致病因子(Nat Rev Cancer.2003；3(3):217-226.)。HPV通过编码两种重要的致瘤蛋白E6和E7维持细胞的转化特性(Journal of Virology.2003；77(19):10186-10201.)。E6可以与E6相关蛋白(E6associated protein，E6AP)形成复合物，进而与肿瘤抑制基因p53结合使其泛素化并降解，最终促进肿瘤的发生(J Infect Dis.2001；183(1):8-15.)。E7可以竞争性结合pRb肿瘤抑制基因，使得与pRb结合的转录因子E2F释放出来，促进细胞周期(Infect Agent Cancer.2010；5:19.)。约有99.7％的宫颈鳞状细胞癌是由HPV感染引起的(AAPS J.2009；11(1):65-77.)，HPV可通过将病毒DNA整合到染色体DNA上(Viruses.2013；5(2):708-731；J Virol.2008；82(24):12565-12568.)，从而使得原癌基因激活至致癌基因或使肿瘤抑制基因失活。其他危险因素基本与性行为有关，包括性交年龄过小、多个性伴侣以及多次分娩等也加速了宫颈癌的发生，这些因素都会增加感染13种高危型HPV的风险(Proc Natl Acad Sci USA.2006；103(5):1522-1527.)。然而，持续的高风险HPV感染不足以使宿主的上皮细胞永生化，宫颈癌的发生常伴随着遗传学的改变(Virology.2009；384(2):400-409.)。