[发明专利]一种抗雄激素效应的检测方法

说明书

本发明涉及抗雄激素效应检测领域，具体而言，涉及一种抗雄激素效应的检测方法。所述检测方法，包括：待检测样品中的抗雄激素和配体物质竞争结合细胞中的雄性激素受体，通过测定与所述受体结合的所述配体物质的量，确定所述抗雄性激素的效应值，并以所述待检测样品对所述细胞的细胞毒活性结果为参考因素对所述效应值进行评估；所述配体物质为所述雄性激素受体的配体；所述竞争结合在无血清反应体系中进行。该方法排除了血清中激素和生长因子及待检测品细胞毒活性对荧光强度检测的影响，可降低成本，减少实验误差，且简化了实验过程。

技术领域

本发明涉及抗雄激素效应检测领域，具体而言，涉及一种抗雄激素效应的检测方法。

背景技术

近年来，关于环境内分泌干扰物(Environmental endocrinedisrupters,EEDs)对野生动物和人类内分泌系统，尤其是对生殖内分泌功能的影响问题十分受人关注，其中又以影响男性生殖健康问题为焦点。世界各地发现许多野生动物(包括哺乳动物、鸟类、两栖类和鱼类)出现生殖系统畸形、生育力下降或丧失、鸟类和两栖类卵的孵化率降低、胚胎死亡率增加、幼体存活率降低、种群数目明显减少等生殖退化现象。环境抗雄激素(environmental antiandrogen,EA)属于环境内分泌干扰物，与环境雌激素一样，可以引起雄性生殖系统发育和功能异常，现为尿道下裂等泌尿生殖道畸形、隐辜的发病率增高，雄性乳头残留，生殖器与虹门距离缩短，辜丸和附晕萎缩，精液量和精子数减少，精子活动度降低，精子畸形率升高等。

有必要对可能携带有环境抗雄激素作用的东西进行检测，为其安全性评价和危险度评定提供一定的科学依据。其中体内检测是常用的检测手段，但其实验繁琐，时间和金钱成本高。而传统的体外检测方法，成本较高，干扰因素较多，检测结果误差大。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗雄激素效应的检测方法，所述的检测方法排除了血清中激素和生长因子及待检测品对荧光强度检测的影响，可降低成本，减少实验误差，且简化了实验过程。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种抗雄激素效应的检测方法，包括：待检测样品中的抗雄激素和配体物质竞争结合细胞中的雄性激素受体，通过测定与所述受体结合的所述配体物质的量，确定所述抗雄性激素的效应值，并以所述待检测样品对所述细胞的细胞毒活性结果为参考因素对所述效应值进行评估；

所述配体物质为所述雄性激素受体的配体；

所述竞争结合在无血清反应体系中进行。

环境抗雄激素效应测定的体外检测过程中，血清中含有激素、生长因子以及培养基中残留的待检测品、酚红等物质，对于最终荧光值检测的稳定性均有较大的影响，必须排除其他添加物质的影响。

为使竞争结合在无血清反应体系中进行，包括在竞争结合反应时使用无血清培养基，以及细胞在竞争结合反应前先除去原有带血清的培养基。无血清条件下，待检测品单独作用于细胞，排除待检测品作用于细胞时血清的干扰。现有技术中，为排除反应体系中血清的干扰，常用活性炭/葡聚糖处理其中的血清，但一方面在体系中引入了新的可能的干扰物，一方面成本较高。普通血清在4000-6000元/500ml，且成品的活性炭/葡聚糖处理胎牛血清在12000元/500ml以上。本发明提供的无血清反应体系，可大大降低成本，及简化操作。

在一些实施方式中，所述评估的方法包括：

比较相同待检测样品浓度下，所述配体物质引起的效应值与细胞存活率之间的关系，若细胞基本没有死亡(细胞存活率≥90％)，则效应值足以证明农药表现出了抗雄激素作用，若细胞死亡较多(细胞存活率＜90％)，则认为待检测样品的细胞毒活性作用干扰了其对于雄激素受体的结合。

在一些实施方式中，所述待检测品包括农药和农药代谢物；