[发明专利]一种禽巴氏杆菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种禽巴氏杆菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗，其特征在于，由禽巴氏杆菌荚膜多糖与白喉类毒素载体蛋白通过纳米微球连接而成；所述禽巴氏杆菌荚膜多糖、纳米微球与白喉类毒素载体蛋白的重量比为15：21：10；所述纳米微球由生物高分子材料制备而成；所述生物高分子材料为壳聚糖、聚乙二醇、聚乳酸-聚乙二醇共聚物、海藻酸钠中的一种或几种。

2.如权利要求1所述的禽巴氏杆菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、称取重量为荚膜多糖1.4倍的制备纳米微球所用的生物高分子材料溶于4倍重量的二氯甲烷中，然后加入含有质量浓度为7％的聚乙烯醇水溶液中，搅拌溶解，得到生物高分子材料的终浓度为3mg/mL的混合液；

S2、将步骤S1制得的混合液在压力为38MPa条件下乳化7次，每次3min，然后以2000

转/分钟速度搅拌15min，得到乳化液，蒸干乳化液中的有机溶剂，得到胶体溶液；

S3、用离心机离心步骤S2制得的胶体溶液，转速为11000r/min，得到直径为80nm的纳米微球，水洗纳米微球，并置于冻干机中冻干保存；

S4、利用膜过滤法和硫酸铵沉淀法分离提纯禽巴氏杆菌荚膜多糖；

S5、将步骤S4制得的禽巴氏杆菌荚膜多糖与步骤S3制得的纳米微球以重量比1：1.4的比例偶联，得到多糖纳米微球偶联体，然后进行醛基化反应得到表面醛基化的多糖纳米微球偶联体；

S6、用质量分数为0.3％的甲醛水溶液对白喉毒素进行脱毒处理制备并分离提纯

得到白喉类毒素载体蛋白；

S7、将步骤S5制得的表面醛基化多糖纳米微球偶联体与步骤S6制得的白喉类毒素

载体蛋白结合，即得。

3.如权利要求2所述的禽巴氏杆菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中醛基化反应具体操作为：

在磷酸缓冲液中，温度为32℃，pH＝6的条件下，将多糖纳米微球偶联体通过质量分数为25％的戊二醛水溶液改性，得到表面醛基化的多糖纳米微球偶联体。