[发明专利]一种粘红酵母去乙酰化酶4蛋白的制备及其应用在审

专利信息
申请号: 201811033935.4 申请日: 2018-09-05
公开(公告)号: CN110878318A 公开(公告)日: 2020-03-13
发明(设计)人: 孙晗笑;刘梦鸽;利时雨 申请(专利权)人: 广州溯原生物科技有限公司
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N9/80;A23L33/10;A23K20/189;A61K38/50;A61P3/00;A61P39/06
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 510635 广东省广州市广州*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 酵母 乙酰化 蛋白 制备 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法。

2.根据权利要求1所述的通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法,其特征在于:包含以下步骤:

(1)质粒的构建,质粒His-Strep pQE-TriSystem-Rt-sirtuin4由上海吉凯基因公司构建;(2)大肠杆菌感受态细胞的制备,质粒转化,提取,鉴定;重组大肠杆菌蛋白表达验证;大肠杆菌发酵表达目的蛋白;提纯目的蛋白。

3.根据权利要求2所述的通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法,其特征在于:第(5)项提纯目的蛋白的步骤为:(1)用1:10(m:V)的变性溶解缓冲液充分悬浮包涵体;超声助溶(破碎菌体条件,2个循环),室温保持2h以上,冷冻离心机8500 rpm离心,收集上清;(2)用不含有SDS的亲和层析柱基础缓冲液稀释收集到的上清液5倍,同时加入20% SDS,SDS的终含量为0.6%,混匀,0.22μm滤膜过滤后备用;(3)用不少于3倍柱床的基础缓冲液平衡亲和柱,直到光吸收平稳,然后在亲和柱中上样刚处理好的蛋白样品;上样后,用基础缓冲液冲洗柱床,直到光吸收恢复;(4)降低洗脱缓冲液流速为上样和平衡柱流速的一半,收集蛋白洗脱峰;(5)高浓度的SDS处理收集的蛋白洗脱峰。

4.权利要求3所述的通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法的提纯步骤,其特征在于,SDS-PAGE分析呈现清晰条带,且蛋白纯度约为96%。

5.根据权利要求2中所述的任意一种或多种通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的步骤制备获得的sirtuin4蛋白。

6.根据权利要求5获得的sirtuin4蛋白在治疗和/或预防线粒体功能障碍相关疾病的药品和功能性食品制备中的应用。

7.根据权利要求5获得的sirtuin4蛋白在治疗和/或预防衰老的药品和功能性食品制备中的应用。

8.根据权利要求5获得的sirtuin4蛋白在治疗和/或预防代谢综合征的药品和功能性食品制备中的应用。

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