[发明专利]一种粘红酵母去乙酰化酶4蛋白的制备及其应用

权利要求书

1.一种通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法。

2.根据权利要求1所述的通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法，其特征在于：包含以下步骤：

(1）质粒的构建，质粒His-Strep pQE-TriSystem-Rt-sirtuin4由上海吉凯基因公司构建；（2）大肠杆菌感受态细胞的制备，质粒转化，提取，鉴定；重组大肠杆菌蛋白表达验证；大肠杆菌发酵表达目的蛋白；提纯目的蛋白。

3.根据权利要求2所述的通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法，其特征在于：第（5）项提纯目的蛋白的步骤为：（1）用1：10（m:V）的变性溶解缓冲液充分悬浮包涵体；超声助溶（破碎菌体条件，2个循环），室温保持2h以上，冷冻离心机8500 rpm离心，收集上清；（2）用不含有SDS的亲和层析柱基础缓冲液稀释收集到的上清液5倍，同时加入20% SDS，SDS的终含量为0.6%，混匀，0.22μm滤膜过滤后备用；（3）用不少于3倍柱床的基础缓冲液平衡亲和柱，直到光吸收平稳，然后在亲和柱中上样刚处理好的蛋白样品；上样后，用基础缓冲液冲洗柱床，直到光吸收恢复；（4）降低洗脱缓冲液流速为上样和平衡柱流速的一半，收集蛋白洗脱峰；（5）高浓度的SDS处理收集的蛋白洗脱峰。

4.权利要求3所述的通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的方法的提纯步骤，其特征在于，SDS-PAGE分析呈现清晰条带，且蛋白纯度约为96%。

5.根据权利要求2中所述的任意一种或多种通过大肠杆菌重组表达制备粘红酵母sirtuin4蛋白的步骤制备获得的sirtuin4蛋白。

6.根据权利要求5获得的sirtuin4蛋白在治疗和/或预防线粒体功能障碍相关疾病的药品和功能性食品制备中的应用。

7.根据权利要求5获得的sirtuin4蛋白在治疗和/或预防衰老的药品和功能性食品制备中的应用。

8.根据权利要求5获得的sirtuin4蛋白在治疗和/或预防代谢综合征的药品和功能性食品制备中的应用。