[发明专利]一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，具体过程包括：海参体腔液预处理、透析法低温除盐、提取主要卵黄蛋白、复溶、透析及干燥。本发明以海参加工过程中的副产物海参体腔液为原料，提高了海参加工过程中副产物的利用率，使其蛋白资源得到充分开发利用，同时减少了海参副产物对环境的污染，对海参体腔液主要卵黄蛋白的开发利用具有重要意义。与传统的蛋白沉淀法如硫酸铵盐析，乙醇沉淀、等电点沉淀等不易规模化生产的方法相比，本发明操作条件温和，不易引起生物大分子的变性。并且提取率高达70％，本发明方法简单，同时可以一次性处理大量样品，不需要复杂仪器辅助，适合大规模生产。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，涉及一种蛋白制备方法，更具体地说，涉及一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法。

背景技术

海参体腔液是海参加工过程中的副产物，作为废弃物丢弃后造成了资源浪费与环境污染。海参营养丰富，经济价值高，其体腔液中含有多种活性成分，但未被很好的利用，目前有关海参体腔液的研究局限在对其中有关免疫成分的研究，海参体腔液还富含丰富的主要卵黄蛋白，主要卵黄蛋白有很高的营养价值，富含丰富的必需氨基酸，如果能对海参体腔液中的主要卵黄蛋白进行回收利用，将会对海参的高值化利用有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于开发一种高效便捷的从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，提高海参加工过程中副产物的利用率，避免资源浪费与环境污染；另外，根据海参体腔液蛋白质单一的特点，开发一种利用有机聚合物聚乙二醇从海参体腔液制备主要卵黄蛋白的方法，该方法具有条件温和、工艺简单、生产效率高等特点。

为达到上述目的，本发明提供了一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，包括如下步骤：

S1、海参体腔液预处理：收集海参体腔液，离心取上清液，得体腔清液；

优选方式下，步骤S1所述海参预处理的方法为：利用滤纸吸干新鲜仿刺参表面的液体，将海参从腹部切开，收集体腔液，所述体腔液在4℃、1500～2000×g条件下离心10～15min，收集上清液，得体腔清液；所述离心预处理的目的在于去除海参体腔液中的不容物杂质，以保证蛋白质的沉淀效率。

优选方式下，步骤S1所述离心具体为，在4℃，1500×g条件下离心15min。

S2、透析法低温除盐：4℃条件下对步骤S1所得体腔清液进行透析除盐；

优选方式下，步骤S2所述透析法低温除盐具体为：利用2～5KDa的透析膜、10～30mM pH7～8的磷酸盐缓冲溶液对步骤S1所得体腔清液进行透析处理48～72h，所述磷酸盐缓冲溶液的用量为体腔清液的10～20倍，控制整个除盐过程磷酸盐缓冲溶液温度在4℃；所述透析除盐的目的在于去除海参体腔清液中的盐离子，减少沉淀过程中盐离子对蛋白质的影响，提高目标蛋白的沉淀效率。

优选方式下，步骤S2所述透析法低温除盐具体为：利用3.5KDa的透析膜、20mMpH7.4的磷酸盐缓冲溶液对海参体腔清液进行透析除盐处理，控制整个除盐过程磷酸盐缓冲溶液温度在4℃。

S3、提取主要卵黄蛋白：使用聚乙二醇提取主要卵黄蛋白；

优选方式下，步骤S3所述提取主要卵黄蛋白的方法为：将聚乙二醇加入步骤S2所得透析除盐后的海参体腔清液，使聚乙二醇终浓度为10％～16％(重量)，使用0.5mol/L的NaOH溶液或0.5mol/L的盐酸溶液调整反应体系pH至7～8，4℃静置3～9h后7500～8500g离心10～20min，弃上清，沉淀为主要卵黄蛋白；所述聚乙二醇分子量为6000；

S4、复溶：将步骤S3所得的主要卵黄蛋白沉淀用磷酸盐缓冲溶液复溶、过滤，得主要卵黄蛋白溶液；