[发明专利]同步检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素的GeXP检测试剂盒和检测方法

说明书

本发明提供一种同步检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素的GeXP检测方法和检测试剂盒，可以快速、高效地同时检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素，以提高益生肠球菌安全性和益生性评价的准确性。所述试剂盒包括多基因PCR引物、阴性样品和阳性样品，其中所述多基因PCR引物包括如SEQ ID No:1‑SEQ ID No:1所示的12对特异性引物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种同步检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素的GeXP检测方法。

背景技术

我国农业部规定允许作为饲料添加剂的益生肠球菌菌种包括粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus Faecium)，同时也作为动物保健品使用。目前，粪肠球菌、屎肠球菌的安全性和益生性检测方法主要是传统的药敏实验、体外抑菌试验及普通PCR技术。传统的药敏实验用菌株对抗生素药片的敏感程度作为判断标准，而体外抑菌试验是以细菌分泌的上清液能否抑制病原菌的生长作为判断依据。这些结果只能宏观评价细菌的抑菌效果，重复性和灵敏度不高，一般只作为辅助手段。现阶段采用最多的还是分子生物学的方法，其主要依赖于PCR技术对某段特异性的基因进行扩增。但普通PCR技术存在一些不足之处：①检测周期长，过程繁琐；②检测灵敏度底、可重复性不高；③检测目的基因过于单一，容易漏检由于外界差异导致的同种不同菌株，不能全面反应该菌株的致病性或益生性。因此，在评价菌株的安全性和益生性时，只有尽可能检测多个特异性基因，才能使鉴定结果更加可信，对菌株的鉴定更加精确。

GeXP系统用于研究多基因表达定量分析，采用通用引物和多重特异性引物组合相结合引发多重PCR扩增的方法，把多重引物的扩增转化为1对通用引物的扩增，从而达到高通量检测的目的。但是，建立一种同时能检测多个基因的GeXP检测方法和检测试剂盒，关键在于特异性引物的设计。

在实现本发明的过程中，本发明人发现现有技术中至少存在以下问题：尚未公开一种同步检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素的GeXP检测方法和检测试剂盒，可以快速、高效地同时检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素，以提高益生肠球菌安全性和益生性评价的准确性。

发明内容

鉴于此，本发明提供一种同步检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素的GeXP检测方法和检测试剂盒，可以快速、高效地同时检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素，以提高益生肠球菌安全性和益生性评价的准确性。

具体而言，包括以下的技术方案：

根据本发明的第一个方面，本发明提供了一种同步检测多种益生肠球菌毒力因子和细菌素的GeXP检测试剂盒，包括多基因PCR引物、阴性样品和阳性样品，其中

所述多基因PCR引物包括如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的用于检测毒力相关基因Acm的引物对1、如SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示的用于检测毒力相关基因As的引物对2、如SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示的用于检测毒力相关基因CylA的引物对3、如SEQID No:7和SEQ ID No:8所示的用于检测毒力相关基因Efafm的引物对4、如SEQ ID No:19和SEQ ID No:10所示的用于检测毒力相关基因GelE的引物对5、如SEQ ID No:11和SEQ IDNo:12所示的用于检测毒力相关基因Esp的引物对6、如SEQ ID No:13和SEQ ID No:14所示的用于检测细菌素相关基因EntA的引物对7、如SEQ ID No:15和SEQ ID No:16所示的用于检测细菌素相关基因EntB的引物对8、如SEQ ID No:17和SEQ ID No:18所示的用于检测细菌素相关基因EntL50A的引物对9、如SEQ ID No:19和SEQ ID No:20所示的用于检测细菌素相关基因EntL50B的引物对10、如SEQ ID No:21和SEQ ID No:22所示的用于检测细菌素相关基因EntP的引物对11、和如SEQ ID No:23和SEQ ID No:24所示的用于检测细菌素相关基因EntQ的引物对12。