[发明专利]一种蒙古韭染色体荧光原位杂交方法

权利要求书

1.一种蒙古韭染色体荧光原位杂交方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、蒙古韭染色体玻片标本的制备，包括如下步骤：

（1）取材：取蒙古韭种子用蒸馏水冲洗1-3次，然后在浸种液中浸泡，然后置于放有2层湿滤纸的培养皿内，加水后置于恒温箱中于22-25℃下培养，待种子根尖长至0.5-1cm，切取根尖1-2mm；所述浸种液由如下浓度的成份组成：红糖，70-90mg/L；甘露醇，120-170mg/L；丙酮，10-40mg/L；余量为水；

（2）制片：将切取的根尖装入小瓶中，适量加水、封盖后，迅速置于0℃冰水混合物中，在0℃的冰箱中预处理20-24h；

（3）固定：冲洗上述预处理后的根尖，用现配的卡诺氏固定液在室温下固定12-24h；

（4）解离：取步骤（3）中的根尖用蒸馏水洗2次，每次6min，以洗去固定液，然后用果胶酶和纤维素酶按重量分数比1:1 混合的酶2.5%（w/w），在37℃解离根尖1 小时后，用蒸馏水洗去酶液，再用现配的卡诺氏固定液在室温下固定1-2h；

（5）染色：取出根尖用解剖刀切下0.5mm左右置于载玻片上，滴一滴染色液，染色，然后放上盖玻片，染色5min后，取滤纸，覆盖在盖玻片上，固定滤纸，然后压片使根端部组织分散摊开；

（6）镜检：装片于显微镜，观察细胞内染色体分布情况，并将分散的玻片标本保存于-20℃下环境中；

S2、45S rDNA探针的制备，从玉米45S rDNA序列中选取一段保守序列合成探针，并在探针序列的5’端或3’端连接荧光基团，所述探针序列为SEQ ID NO：1-3中所示的任意一个核苷酸序列；

S3、染色体荧光原位杂交；

S4、洗脱、检测。

2.根据权利要求1所述的蒙古韭染色体荧光原位杂交方法，其特征在于，所述探针序列如SEQ ID NO：1-2任一所示。

3.根据权利要求1或2所述的蒙古韭染色体荧光原位杂交方法，其特征在于，所述浸种液由如下浓度的成份组成：红糖，80mg/L；甘露醇，150mg/L；丙酮，25mg/L；余量为水。

4.一种蒙古韭的根尖染色制片方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）取材：取蒙古韭种子用蒸馏水冲洗1-3次，然后在浸种液中浸泡，然后置于放有2层湿滤纸的培养皿内，加水后置于恒温箱中于22-25℃下培养，待种子根尖长至0.5-1cm，切取根尖1-2mm；所述浸种液由如下浓度的成份组成：红糖，70-90mg/L；甘露醇，120-170mg/L；丙酮，10-40mg/L；余量为水；

（2）制片：将切取的根尖装入小瓶中，适量加水、封盖后，迅速置于0℃冰水混合物中，在0℃的冰箱中预处理20-24h；

（3）固定：冲洗上述预处理后的根尖，用现配的冰醋酸：酒精=1:3的卡诺氏固定液，在室温25℃下固定12-24h；

（4）解离：取步骤（3）中的根尖用蒸馏水洗2次，每次6min，以洗去固定液，然后用果胶酶和纤维素酶按重量分数比1:1 混合的酶2.5%（w/w），在37℃解离根尖1 小时后，用蒸馏水洗去酶液，再用现配的卡诺氏固定液在室温下固定1-2h；

（5）染色：取出根尖用解剖刀切下0.5mm左右置于载玻片上，滴一滴染色液染色，然后放上盖玻片，染色约5min后，取滤纸，覆盖在盖玻片上，固定滤纸，然后压片使根端部组织分散摊开；

（6）镜检：装片于显微镜，观察细胞内染色体分布情况，并将分散的玻片标本保存于-20℃下环境中。

5.根据权利要求4所述的蒙古韭的根尖染色制片方法，其特征在于，所述浸种液由如下浓度的成份组成：红糖，80mg/L；甘露醇，150mg/L；丙酮，25mg/L；余量为水。