[发明专利]一种酵母功能微球的制备方法及其在免疫分析中的应用

权利要求书

1.一种利用酵母菌制备功能微球的方法，其特征在于下列步骤：

（1）配制YPD液体培养基，灭菌后用该培养基活化酵母菌6-8 h，连续活化两次，当OD₆₀₀值为0.3-0.9时，按1%体积的量接种后进行扩大培养，然后在28 ℃，200 rpm的恒温摇床中培养，培养至10 h时，取样并在显微镜下观察，此后，每隔半小时取样观察一次，培养12 h后在显微镜下观察到的酵母细胞形态大小一致时，立即离心收集酵母细胞，并用去离子水洗涤并离心，重复3-5次；其中所述的酵母菌菌种为毕赤酵母(Pichia pastoris)；

（2）利用10%浓度的甲醛溶液将酵母细胞重悬，4℃放置6 h，离心去除甲醛溶液，用去离子水洗涤或离心，重复3次；然后用30 mL去离子水重悬湿重为1 g的酵母菌菌体，调整超声波细胞破碎仪的输出功率至220 W~450 W，振幅为0%-80%，超声处理5-30 min，超声处理为间歇操作，即在冰浴中超声3 s停3 s；

（3）将上步处理的酵母用去离子水离心和洗涤，重复3次；

（4）按每1 g湿重的酵母菌菌体配制30 mL去除缓冲液（Decoating Buffer）的要求配置去除缓冲液并将酵母重悬，在37 ~80 ℃水浴中搅拌处理0.5-2 h，将处理后的酵母用去离子水离心和洗涤，重复6-10次，最后用适量的去离子水重悬，得到酵母微球；

（5）将制备好的胶体金纳米颗粒与制备好的浓度范围为10⁶-10⁸个/mL的酵母悬液混合后于120~140 rpm，37 ℃，恒温摇床中振荡孵育5-60 min ，使胶体金颗粒均匀吸附在酵母表面，形成酵母@胶体金的复合微球，然后用去离子水反复离心洗涤3次，去除未吸附的胶体金纳米颗粒；其中所述的胶体金粒径为8-20 nm。