[发明专利]一种青钱柳叶总黄酮的制备方法及其应用

说明书

本发明属于中药领域，具体涉及一种青钱柳叶总黄酮的制备方法及其在制备防治非酒精性脂肪肝炎的药物和保健品中的应用。本发明提供的青钱柳叶总黄酮的制备方法，采用干燥的青钱柳叶，经粉碎、提取、过滤等制得青钱柳叶提取液，利用双水相体系萃取，青钱柳叶总黄酮溶液呈亮黄色，富集在上相中，进一步分离、减压、浓缩、干燥即得。采用本发明制得的青钱柳叶总黄酮萃取率高达80％‑95％。本发明制备的青钱柳叶总黄酮具有降低转氨酶活性，降血糖，降血脂，抑制脂肪累积的作用，保障了青钱柳叶总黄酮在制备治疗非酒精性脂肪肝炎药物中的应用。

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种青钱柳叶总黄酮的制备方法及其应用。

背景技术

非酒精性脂肪肝炎(NASH)是指肝组织病理变化与酒精性肝炎相似，但无明确饮酒史的一类慢性肝炎，源自与胰岛素抵抗(IR)相关的肝脏脂肪过度蓄积，具有肝细胞变性、坏死、炎症侵润等特征，会进一步发展为肝硬化、肝癌。NASH的发病率随经济发展而日趋攀升，人群中约30％的肥胖者会发生NASH，而WHO在2016年的统计资料中显示，全球超过6.5亿人处于肥胖状态，NASH已成为威胁人类健康的严峻问题。IR导致的“二次打击”学说是NASH的主要发病机制：第一次打击为IR导致的肝脂肪沉积、肝细胞变性；第二次打击为氧化应激和脂质过氧化损伤，造成肝细胞本身和线粒体的慢性持续损伤和炎症。

根据NASH的发病机制筛选有效药物是当前研究的热点，重点集中于胰岛素增敏剂、抗氧化剂、降脂药物等。中国专利申请CN105592846 A公开了一种治疗有需要的受试对象的脂肪肝疾病或病症的方法，该方法虽然对NASH有一定的抑制作用，但是其受试对象范围较小，治疗周期长，而且所用的药物组合物中包含酰胺及烯酸等物质，具有一定的毒副作用。

青钱柳(Cyclocarya paliurus)为胡桃科青钱柳属落叶乔木，树叶味甘甜，具有生津清热，降血压，降血糖，降血脂，延年益寿的功效。《中国中药资源志要》记载青钱柳树叶、树皮具有清热消肿，止痛的功能。青钱柳叶主要含多糖，黄酮，以及三萜类等化学成分。药理活性方面的研究表明：青钱柳中的多糖具有降血糖，降血脂，抗脂质过氧化等药理活性；黄酮能够抑制α-葡萄糖苷酶的活性，同时具有很强的清除自由基能力；目前关于青钱柳叶总黄酮治疗NASH的研究尚未发现。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种青钱柳叶总黄酮的制备方法及其应用。为了达到上述目的，本发明提供了一种青钱柳叶总黄酮的制备方法，具体操作步骤如下：

a.取青钱柳的干燥叶，进行粉碎，过40-50目筛，得青钱柳粗粉，将青钱柳粗粉置于乙醇水溶液中浸泡0.5～1.5h，再加热回流提取1～3h，共提取3-5次后进行过滤合并，得青钱柳叶提取液；

b.向聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中加入步骤a制得的青钱柳叶提取液，组成双水相体系；

c.调节双水相体系的pH值为6.5-7.5，磁力搅拌10min，然后在25℃条件下静置1-2h，青钱柳叶总黄酮富集在上相中，呈现亮黄色，上层为青钱柳叶总黄酮溶液与聚乙二醇的混合物；

d.移取步骤c获得的上层混合物，上D101大孔树脂柱，用超纯水洗脱除去聚乙二醇，再用乙醇水溶液洗脱，得青钱柳叶总黄酮洗脱液；

e.将步骤d所得的青钱柳叶总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥，即得。

优选地，所述步骤a中的乙醇水溶液的质量为青钱柳粗粉质量的5-15倍，乙醇水溶液的体积分数为55～95％。

优选地，所述步骤b中聚乙二醇的浓度范围为15％-25％；所述的磷酸缓冲液的浓度范围为15％-20％。

优选地，所述步骤c中的青钱柳叶总黄酮溶液的浓度为50mg/mL。