[发明专利]一种基于器官芯片的人早期胎盘发育模型建立方法

权利要求书

1.一种基于器官芯片的人早期胎盘发育模型建立方法，其特征在于：采用了一种三维基质材料，即人工基底膜Matrigel，按照以下步骤进行：

孔板修饰与人多能干细胞接种培养

先用人工基底膜修饰6孔板并放于4°冰箱4小时-7天，之后放入37°培养箱20-50min，用细胞消化液室温消化；用细胞刮板刮下细胞团，600r离心1-3min，细胞用含Y27632 的mTeSR1培养基重悬使细胞为小团块后接种于已修饰好的6孔板，37°培养1-4h后将培养液更换为不含Y27632 的mTeSR1培养基培养；

细胞消化并接种于三维基质中

待hPSC细胞生长为70%-90%后用消化液室温消化，用细胞刮板刮下细胞团，离心600r1-3min，将上清液体吸走，用含BMP4的诱导hPSC分化的培养基将matrigel稀释到一定比例后将细胞重悬得到合适的接种密度并接种，37°培养箱放置20-40min使悬有细胞的matrigel固化，之后仍为含BMP4的诱导hPSC分化的培养基；

人早期胎盘发育模型的建立

接以上步骤（2）每天更换培养基，培养基为步骤（2）中含BMP4的诱导hPSC分化的培养基，模型建立若干天；

于步骤（1）所述人工基底膜修饰6孔板具体为：将人工基底膜稀释500-1000倍，每孔1.5ml稀释液，放于4°冰箱4小时-7天；

所述含Y27632 的mTeSR1培养基中，Y27632 的浓度范围为1-100 mM；

步骤（2）所述matrigel稀释具体为培养基：matrigel的体积比为0-3:1，细胞接种密度为1×10⁴-1×10¹⁰ cells/ml;步骤（2）所述含BMP4的诱导hPSC分化的培养基成分为：体积浓度96%的DMED/F12、体积浓度1 %的双抗、体积浓度1%的谷氨酰胺、体积浓度1%的非必须氨基酸（MEMNEAA）、体积浓度1 %的ITS、100 ng/ml的肝素、10 ng/ml的 BMP4，由此配置的每50ml培养基中添加1gBSA，溶解后即为含BMP4的诱导hPSC分化的培养基;

步骤（3）所述模型建立时间范围为4-12天;

该模型用于细胞形态的表征，包括hPSC细胞向滋养层细胞分化情况、融合型滋养层细胞、侵袭型滋养层细胞细胞类型的表征，与2D条件下hPSC诱导分化的表征。