[发明专利]红花CYP75A1基因及其应用

说明书

本发明公开了红花CYP75A1基因，是以红花花瓣的RNA反转录的cDNA为模板进行编码区序列的扩增，获得序列为1287bp的基因，命名为CtCYP75A1；利用红花CYP75A1基因构建载体转化烟草叶片，经实验表明，CtCYP75A1基因能够促进黄酮的合成，CtCYP75A1基因被抑制后能够降低黄酮含量，在培育高含量黄酮化合物转基因植物方面具有广阔的前景。

技术领域

本发明属生物工程领域，具体涉及红花CYP75A1基因及其在提高植物黄酮含量中的应用。

背景技术

红花（Carthamus tinctorius L.）为一年生草本植物，属菊科植物的干燥管状花。红花具有活血通经，去瘀疗伤，宣毒透疹等功效，其主要有效成分为红花黄色素和红花红色素。红花黄色素为红花中多种水溶性查尔酮成分的混合物，不但是很有价值的食用色素，而且具有活血通络、消炎镇痛等功效，在血管性疾病、高血压、糖尿病并发症等发面亦有重要作用。细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450，简称CYP450)是一类亚铁血红素。亚铁血红素是硫醇盐蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢，研究表明，CYP450能够参与细胞的多种生理功能，催化内源性物质如脂类、黄酮类、萜类、生物碱类等的生物合成代谢，此外，CYP尤其在黄酮的生物合成中起着至关重要的作用，主要调控花色素等物质的合成，决定合成花色素苷的种类和花的颜色。前人的研究结果也发现，CYP亚家族成员在植物花瓣中能够催化w末端的连续氧化反应，从而影响其次生代谢产物的合成及信号传导。CYP蛋白家族在调控植物生长发育及次生代谢调控方面起着重要作用，关于此方面的研究多集中在玉米、小麦、水稻、大豆等植物上，而在药用植物红花上的研究还未见报道。

发明内容

本发明目的是为提高植物黄酮含量，而提供红花CYP75A1基因。

红花CYP75A1基因，其核苷酸序列如序列表SEQ NO.1所示；

所述的红花CYP75A1基因，它是红花花瓣总RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板，用引物：

CYP75A1R：ATGCTCATTCACTTTGGTAGTTT

CYP75A1F：TCACCGAGCACTTAACTTGAC

进行PCR扩增获得。

一种表达载体，它是在植物表达载体中插入了序列表SEQ NO.1所示的核苷酸序列；

所述的表达载体为pBASTA。

所述的红花CYP75A1基因在培育高含量黄酮化合物转基因植物的应用；

所述的植物为烟草。

本发明提供了红花CYP75A1基因，是以红花花瓣的RNA 反转录的cDNA 为模板进行编码区序列的扩增，获得序列为1287bp的基因，命名为CtCYP75A1；利用红花CYP75A1基因构建载体转化烟草叶片，经实验表明，CtCYP75A1基因能够促进黄酮的合成，CtCYP75A 1基因被抑制后能够降低黄酮含量，在培育高含量黄酮化合物转基因植物方面具有广阔的前景。

附图说明

图1 红花花瓣RNA提取电泳结果图；

图2 CtCYP75A 1基因编码区序列验证电泳图；A:RT-PCR结果；B：菌液PCR；C：酶切图谱；

图3 红花CtCYP75A1基因植物表达载体的构建图；

图4 红花CtCYP75A1基因菌液PCR鉴定；

图5 红花CtCYP75A1基因酶切鉴定图；

图6 超表达CtCYP75A1基因的转基因植株的黄酮含量对比；