[发明专利]基因工程化的T细胞及应用

权利要求书

1.一种基因工程化的T细胞，其特征在于，所述T细胞的内源性T细胞受体(TCR)失活或者不具有活性；且

所述T细胞包含编码可结合靶抗原的外源性受体，及受所述外源性受体调控的开放阅读框，当所述外源性受体结合所述靶抗原，能够启动所述开放阅读框的表达。

2.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述开放阅读框通过启动子受所述外源性受体的调控。

3.如权利要求2所述的T细胞，其特征在于，所述外源性受体可引发CD3信号的活化，所述启动子活性受TCR信号活化调控。

4.如权利要求2所述的T细胞，其特征在于，所述T细胞包含与所述启动子可操作相连的开放阅读框的核酸，所述启动子活性受TCR信号活化调控，所述外源性受体可引发CD3信号活化，当所述外源性受体结合所述靶抗原后，所述启动子调节所述开放阅读框的表达。

5.根据权利要求1的T细胞，其特征在于，所述T细胞不表达内源性T细胞受体(TCR)。

6.根据权利要求1的T细胞，其特征在于，采用基因敲除技术或基因沉默技术处理所述内源性TCR，使内源性TCR不具有活性；

优选地，采用基因定点敲除技术敲除内源性TCR基因，所述基因定点敲除技术包括CRISPR/Cas9技术、人工锌指核酸酶(Zinc Finger Nucleases，ZFN)技术、转录激活样效应因子(transcription activator-like effector，TALE)技术或TALE-CRISPR/Cas9技术；

更优选地，采用CRISPR/Cas9技术。

7.根据权利要求6的T细胞，其特征在于，所述基因敲除或基因沉默是在TCR的α和β链中的一种或两种链的恒定区域进行基因敲除或基因沉默；

优选的，对TCR的α和β链中的一种或两种链的恒定区域的相应编码基因的外显子进行基因敲除或基因沉默。

8.根据权利要求7所述的T细胞，其特征在于，在TCR的α链的恒定区域进行基因敲除或基因沉默，

优选的，对内源性TCRα链恒定区的第一外显子进行基因敲除或者基因沉默。

9.根据权利要求2-4中任一项所述的T细胞，其特征在于，所述启动子包含依赖TCR信号活化的转录因子的结合基序。

10.根据权利要求9所述的T细胞，其特征在于，所述启动子包含与依赖TCR信号活化的转录因子的结合基序可操作相连的最小启动子。

11.根据权利要求10所述的T细胞，其特征在于，所述最小启动子为细胞因子最小启动子，包括白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子最小启动子，优选为IFN-γ、TNF-α或IL-2最小启动子，更优选为IL-2最小启动子。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的T细胞，其特征在于，所述结合基序包括NFAT、NF-κB或AP-1结合基序或其组合，优选为NFAT结合基序，更优选为两个或多个NFAT结合基序，最优选为6个NFAT结合基序。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的T细胞，其特征在于，所述最小启动子由与SEQID NO：8具有90％同一性的核苷酸序列编码。