[发明专利]一种通过多能干细胞分化获得具有吞噬功能的巨噬细胞的方法

权利要求书

1.一种应用细胞诱导培养基的细胞诱导培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将细胞放置在第一培养基中进行第一阶段培养，然后在第二阶段、第三阶段、第四阶段、第五阶段、第六阶段和第七阶段依次用第二培养基、第三培养基、第四培养基、第五培养基、第六培养基和第七培养基进行培养；

所述第一阶段为接种后0-1天，所述第二阶段为接种后2-7天，所述第三阶段为接种后8-10天，第四阶段为接种后10-20天，第五阶段为接种后20-22天，第六阶段为接种后22-28天，第七阶段为接种后第29天；

所述第一培养基中，BMP4和bFGF的终浓度依次为8-12ng/ml和3-7ng/ml；

所述第二培养基中，BMP4，bFGF，VEGF和SCF的终浓度依次为8-12ng/ml、3-7ng/ml、48-52ng/ml和95-105ng/ml；

所述第三培养基中，bFGF，VEGF，SCF，IGF1，IL-3，M-CSF和GM-CSF的终浓度依次为8-12ng/ml、48-52ng/ml、48-52ng/ml、8-12ng/ml、23-27ng/ml、48-52ng/ml和48-52ng/ml；

所述第五培养基中，bFGF，VEGF，SCF，IGF1，IL-3，M-CSF和GM-CSF的终浓度依次为8-12ng/ml、48-52ng/ml、48-52ng/ml、8-12ng/ml、23-27ng/ml、95-105ng/ml和95-105ng/ml；

所述第六培养基中，bFGF，VEGF，SCF，IGF1，M-CSF和GM-CSF的终浓度依次为8-12ng/ml、48-52ng/ml、48-52ng/ml、8-12ng/ml、95-105ng/ml和95-105ng/ml；

所述第七培养基中，FBS，M-CSF和GM-CSF的终浓度依次为质量分数8-12%、95-105ng/ml和95-105ng/ml；

所述第四阶段、第五阶段、第六阶段和第七阶段进行培养时均需要提供基质胶；

所述方法由拟胚体经过细胞诱导培养得到巨噬细胞；

所述拟胚体由诱导性多能干细胞得到；

所述第五阶段进行培养的细胞为所述第四阶段培养后得到的悬浮细胞。

2.根据权利要求1所述的细胞诱导培养方法，其特征在于，所述第一培养基、第二培养基和第三培养基采用STEMdiff™ APEL™ 2或mTeSR1作为基础培养基；

和/或，所述第四培养基、第五培养基和第六培养基采用StemPro™-34作为基础培养基；

和/或，所述第七培养基采用RPMI-1640作为基础培养基。

3.根据权利要求1所述的细胞诱导培养方法，其特征在于，所述第七培养基中，所述FBS经过灭活处理。

4.根据权利要求1所述的细胞诱导培养方法，其特征在于，所述第二阶段培养时需要每隔一天更换新的第二培养基。

5.根据权利要求1所述的细胞诱导培养方法，其特征在于，所述第三阶段培养时需要每隔一天更换新的第三培养基。

6.根据权利要求1所述的细胞诱导培养方法，其特征在于，所述基质胶包括Matrigel或Laminin-521。

7.权利要求1-6任一项所述的细胞诱导培养方法在诱导性多能干细胞或拟胚体诱导分化成巨噬细胞中的应用。