[发明专利]一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法在审
| 申请号： | 201811052044.3 | 申请日： | 2018-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN109187469A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 蒋治良;姚东梅;李重宁;梁爱惠 | 申请（专利权）人： | 广西师范大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N21/78 |
| 代理公司： | 桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司 45112 | 代理人： | 刘梅芳 |
| 地址： | 541004 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 葡萄糖 荧光峰强度 酶催化 制备 被测样品 工作曲线 荧光光谱 葡萄糖标准溶液 空白对照溶液 荧光分子探针 定量测定 线性关系 灵敏度 被测物 目标物 荧光 | ||
【权利要求书】：
1.一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法，其特征是，包括如下步骤：
(1)制备已知浓度的葡萄糖标准溶液体系：于不同的刻度试管中，依次加入1μL-40μL500μmol/L葡萄糖标准溶液、10μL-50μL 0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL-200μL0.02mol/L pH 7.4PBS缓冲溶液和50μL-150μL 0.5mmol/L TMB溶液，摇匀、于40℃水浴反应20min，冰水终止反应，用二次蒸馏水定容至1.5mL；
(2)制备空白对照溶液体系：采用步骤(1)的方法不加葡萄糖标准溶液制备空白对照溶液体系；
(3)分别取按步骤(1)、(2)制备的葡萄糖标准溶液体系及空白对照溶液体系倾入石英比色皿中，在荧光光谱仪上，设定仪器参数以280nm为激发波长扫描获得体系的荧光光谱，测定380nm处的荧光强度值为F，同时测定空白对照溶液体系的荧光强度值为F0，计算ΔF＝F-F0；
(4)依据ΔF对葡萄糖的浓度关系做工作曲线；
(5)依照步骤(1)的方法制备样品溶液，其中加入的葡萄糖标准溶液替换为样品溶液，并按步骤(3)的方法测定样品溶液的荧光峰强度值为F样品，计算ΔF样品＝F样品-F0；
(6)依据步骤(4)的工作曲线，计算出样品溶液葡萄糖的含量。
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