[发明专利]用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片、试剂盒及方法

说明书

本发明“用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30‑Like株的冻干微芯片、试剂盒及方法”，属于分子检测领域。所述冻干微芯片的特征是：用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30‑Like株的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；所述荧光PCR反应体系包括：下述引物和探针：猪蓝耳病毒经典株上游引物，猪蓝耳病毒经典株下游引物，猪蓝耳病毒经典株Taqman探针序列；NADC30‑Like株上游引物，NADC30‑Like株下游引物，NADC30‑Like株Taqman探针。本发明同时检测猪蓝耳经典株和NADC30‑Like株病毒，所述检测试剂盒检测方法准确性、特异性和敏感性高，检测时间短。

技术领域

本发明涉及病毒的分子生物学检测技术领域，特别是涉及一种用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片、试剂盒及方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)俗称“猪蓝耳病”。该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus，PRRSV)引起猪发生繁殖与呼吸障碍的一种重要疫病。PRRSV主要感染猪，尤其是母猪，该病严重影响其生殖功能，临床主要特征为流产，产死胎、木乃伊胎、弱胎，呼吸困难，在发病过程中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故又称为蓝耳病。它是近些年危害猪场的头号疾病，不仅会造成母猪出现流产、死胎、发情异常、免疫抑制，还会导致商品猪出现腹泻、呼吸道疾病，严重影响猪只生长速度与健康。猪蓝耳经典毒株具有一定的致病性，但毒力较低，是作为猪蓝耳活疫苗防治高致病猪蓝耳的最佳选择。NADC30毒株是2013年在中国首次发现，随后便不断的变异，与国内的猪蓝耳毒株重组，命名为NADC30-Like毒株，且其中少数NADC30-Like毒株毒力较强。国内的NADC自2015年，学者对蓝耳病NADC30-Like毒株的爆发进行了流行病学调查。实验结果表明蓝耳病NADC30-Like毒株在中国已广泛传播，并可能造成猪的临床疾病。

近年来，虽然各国科学家已对PRRSV进行了多方面的研究，但至今还未找到有效根除PRRS的方法，其防控有赖于及时准确地诊断和疫情的控制。诊断是防控的基础不同基因型和致病性的PRRSV毒株抗原性差异较大、诊断技术和防控疫苗等均有不同，依据检测目的不同分类型诊断是该病防控的首要之举。目前对猪蓝耳病病毒的检测所采用的方法主要还是传统的病毒分离鉴定、ELISA方法及普通PCR检测。病毒分离操作烦琐，耗时长，漏检率高；ELISA方法相对简便，快速，但对于微量或杂质较多的样品，其特异性和灵敏度较低，可能造成漏诊或误诊。PCR作为一种新型的分子生物学技术，自诞生以来，由于其特异性、敏感性高，能在短时间内通过基因扩增得到大量的目的片段，使之成为目前PRRSV检测的重要手段之一。但普通PCR仍存在操作繁琐、检测时间长且易污染等弊端。所以目前市场急需快速、准确、灵敏度高，且便携，能现场操作的检测和鉴别诊断的试剂产品。

发明内容

基于本领域的上述需求，本发明的目的在于提供一种用于鉴别猪蓝耳经典株与NADC30-Like株病毒冻干微芯片及试剂盒，使其能够快速、有效地对猪蓝耳病病毒进行检测，准确性、特异性和敏感性高，重复性好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的冻干微芯片，其特征在于，用于鉴别猪蓝耳病毒经典株与NADC30-Like株的荧光PCR反应体系通过冻干被固定在所述微芯片上；

所述荧光PCR反应体系包括：下述引物和探针：

猪蓝耳病毒经典株上游引物：5＇-TGTTGTGACTTGAGCGTCGAT-3＇，

猪蓝耳病毒经典株下游引物：5＇-CAAAAGGCCAGGAACCGTAA-3＇，

猪蓝耳病毒经典株Taqman探针序列：5＇-TTTGTGATGCTCGTCAGG-3＇；