[发明专利]一种猪瘟病毒抗体检测ELISA诊断试剂盒

说明书

本发明首先提供一种稳定表达猪瘟病毒E0蛋白的中国仓鼠卵巢细胞株CHO‑E0，于2018年7月19日保藏在位于武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO:C2018155。本发明再一个方面提供了一种E0抗体ELISA试剂盒，包含有包被猪瘟病毒E0蛋白的ELISA板、E0阳性对照血清、E0阴性对照血清、样品稀释液、酶标记结合物、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B和终止液。本发明提供了大量制备猪瘟病毒E0蛋白的方法，并提供了以猪瘟病毒E0蛋白为抗原的ELISA抗体检测试剂盒，该试剂盒具有较高的灵敏性、特异性、重复性，可以大规模推广应用。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种稳定表达猪瘟E0蛋白的重组细胞系以及猪瘟E0蛋白抗体检测ELISA鉴别诊断试剂盒。

背景技术

猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus，CSFV)引起的猪和野猪的一种高传染性疾病。通过严格的净化措施本病已在世界部分养猪国家得以净化，如美国、澳大利亚、加拿大、爱尔兰、新西兰和瑞士等国家已宣布消灭了猪瘟，但在大多数养猪国家(如，中国)仍然是对养猪业危害巨大的重要传染病。

目前国际上使用的疫苗主要是中国的猪瘟兔化弱毒疫苗、日本的GPE疫苗和法国的Thireval疫苗。我国的猪瘟兔化弱毒疫苗是国际公认的安全有效的弱毒疫苗，亦是国内唯一应用的弱毒疫苗。但这些弱毒疫苗免疫效果受基础抗体的影响很大，且无法区分是疫苗产生的抗体还是自然感染产生的抗体，对猪瘟的净化非常不利。因此，需要另外一种病毒蛋白来进行感染猪的血清学鉴别诊断。目前针对E2的试剂盒主要使用IDEXX生产的猪瘟E2ELISA检测试剂盒，但针对NS2-3的抗体不能用于鉴别诊断。因此，研制能够鉴别诊断疫苗抗体还是自然感染产生的抗体的诊断方法极其重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定表达猪瘟E0蛋白的重组细胞系以及猪瘟E0蛋白抗体检测ELISA鉴别诊断试剂盒，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种稳定表达猪瘟病毒E0蛋白的中国仓鼠卵巢细胞株CHO-E0，于2018年7月19日保藏在位于武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCCNO:C2018155，

本发明再一个方面提供了一种E0抗体ELISA试剂盒，包含有包被猪瘟病毒E0蛋白的ELISA板、E0阳性对照血清、E0阴性对照血清、样品稀释液、酶标记结合物、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B和终止液。

所述的E0阴性对照血清是E0蛋白ELISA抗体阴性母猪或E0抗原PCR检测阴性的血清；

所述的E0阳性对照血清是用猪瘟活疫苗免疫14～28日龄健康易感猪(E0ELISA抗体阴性，E0抗原PCR检测阴性)后获得的血清；

洗涤液/样品稀释液：0.01mol/L pH7.4的PBST缓冲液。

底物溶液A：pH 5.0柠檬酸醋酸缓冲液；

底物溶液B：pH 5.0 0.01mol/L pH 5.0TMB-四甲基联苯胺。

终止液：2mol/L硫酸溶液。

本发明所使用的猪瘟病毒E0蛋白，是用保藏号为：CCTCC NO:C2018155的中国仓鼠卵巢细胞株CHO-E0表达制备的。

本发明提供了大量制备猪瘟病毒E0蛋白的方法，并提供了以猪瘟病毒E0蛋白为抗原的ELISA抗体检测试剂盒，该试剂盒具有较高的灵敏性、特异性、重复性，可以大规模推广应用。

附图说明

图1：成功包装的猪瘟病毒E0蛋白重组质粒慢病毒图；