[发明专利]一种用纤维素酶原位修饰金芯片的方法

权利要求书

1.一种纤维素酶原位修饰金芯片的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤(1)：所用芯片为金表面的石英晶体微天平或表面等离子体共振仪芯片，实验前将金芯片清洗后用氮气吹干，然后放入紫外-臭氧清洗机照射10-30min；

步骤(2)：用75％乙醇为溶剂配制40mM的11-巯基十一烷酸与3-巯基丙酸；

步骤(3)：用pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液配制2mM的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和5mM的N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐的溶液，和50μg/ml的纤维素酶液体；

步骤(4)：将步骤(1)清洗并照射后的芯片放置在QCM或SPR流动池内；

步骤(5)：首先以0.1ml/min的流速通入75％的乙醇溶液把基线走平；

步骤(6)：待平稳后，把步骤(2)中配制的11-巯基十一烷酸与3-巯基丙酸溶液按体积比10∶1的比例混合后，以0.1ml/min的流速通入石英晶体微天平或表面等离子体共振仪的流动池，待检测信号平衡后通入75％乙醇冲洗；

步骤(7)：接下来把步骤(3)中配制的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐溶液以体积比1∶1混合，然后以0.1ml/min的流速通入系统，15min后停止通液体；

步骤(8)：一小时后重新启动泵，以0.1ml/min的流速通入pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液；

步骤(9)：待信号平稳后以0.1ml/min的流速通入步骤(3)配制的纤维素酶液体，纤维素酶吸附到芯片上，待吸附平衡后通入磷酸盐缓冲溶液冲洗去未牢固结合的纤维素酶，最后得到原位纤维素酶修饰的金芯片。