[发明专利]一种利用SSR分子标记鉴定七星萝卜杂交种纯度的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定萝卜杂交种七星种子纯度的方法。该方法包括：以待测样本基因组DNA为模板，利用序列1和序列2组成的引物对QX‑SSR1进行PCR扩增，利用凝胶电泳对扩增产物电泳分离，根据电泳结果是否同时含有133 bp和138 bp条带来确定是否为真正的七星杂交种。本发明可将七星杂交种与其母本、父本种子区分，能替代传统的田间纯度鉴定方法，具有快速、高效、操作简单且不受环境影响等优点，具有较高的商业应用价值。

技术领域

本发明属于蔬菜育种与应用技术领域，涉及一种利用SSR分子标记鉴定萝卜杂交种七星种子纯度的方法。

背景技术

萝卜（Raphanus sativus L.）属于十字花科萝卜属一年或二年生植物，以肉质根为主要食用器官。萝卜在世界各地均有种植，我国的萝卜生产第一大国，在我国，萝卜的栽培面积和总产量均位于各类蔬菜的前三位。萝卜富含碳水化合物和多种维生素，是我国重要的食用蔬菜之一。萝卜主要分为青萝卜、白萝卜、绿萝卜和红萝卜等，有浙江萧山的“一刀切”萝卜、天津卫青萝卜、山东潍坊萝卜等优秀的萝卜种类。七星萝卜是天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所利用L13和L118杂交育成的具有爽口、脆甜的青萝卜一代杂交种，可直接食用的优质水果型萝卜，具有很高的经济价值。

萝卜的种类繁多，不同品种的营养价值、栽培方式和口感都不尽相同，优质的品种具有更高的经济价值，而种子质量直接影响最终的产量和经济效益，杂交种子的纯度又是种子质量的重要评价指标和影响因素，因此，保证杂交种子的纯度尤为重要。萝卜是雌雄同花的自花授粉植物，在育种过程中，一般利用自交不亲和系材料，将父本的花粉授到母本的雌花柱头上，从而生产杂交种。如果母本的自交不亲和性不完全，就可能造成自交种的产生，出现假的杂交种。在萝卜遗传育种中对种子纯度鉴定的方法，仍以传统手段为主，将杂交种种在土中，生长到一定时期时，依据表型和经验判断种子的纯度，具有工作量大、周期长、易受环境影响等不利因素，往往需要较长时间的周期，才能获得结果，因此可能错过杂交种最佳的销售和播种时间。

SSR（simple sequence repeat）分子标记为近年来发展起来的一种DNA分子遗传标记技术，具有共显性遗传、可靠性强、重复性高、多态性丰富等优点，使得其在遗传关系分析、遗传图谱的构建、品种鉴定等方面得到广泛应用。我们发明了一种利用SSR分子标记鉴定七星萝卜杂交种子纯度的方法，用于快速、准确、便捷的鉴定杂交种子的纯度。

发明内容

鉴定萝卜杂交种子的纯度，传统方法需要在田间种植萝卜材料，待生长到一定时期，才能根据性状判断种子的纯度，具有费时、费力易受环境影响等缺点。本发明提供了一种利用SSR分子标记鉴定七星萝卜杂交种子纯度的方法，利用该方法对萝卜进行DNA水平的鉴定，可以克服传统育种中种子纯度鉴定的缺点，具有很高的实用价值。

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一种用于检测七星萝卜杂交种子纯度特异性引物对QX-SSR1，其特征在于单链DNA序列从5`到3`端为：

上游引物：ATAATGGAAATCCCTGACCA SEQ ID NO:1

下游引物：AGCAAATGAAAGGCAAAACT SEQ ID NO:2。

用于检测七星萝卜杂交种子纯度特异性引物对QX-SSR1，其特征在于将SEQ IDNO:1所示的单链DNA分子的第一个碱基A删除的单链DNA序列： TAATGGAAATCCCTGACCA SEQID NO:3；

本发明进一步公开了采用特异性引物对QX-SSR1检测七星萝卜杂交种子纯度的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

1). 利用CTAB法提取待测萝卜样品任意组织或器官的基因组DNA；