[发明专利]一种集靶向、光热于一体的红细胞仿生型纳米粒的制备方法

说明书

本发明涉及制药领域，本发明提供了一种集靶向、光热于一体的红细胞仿生型纳米粒的制备方法。本发明首先提取得到红细胞膜，然后将吲哚菁绿负载在聚乳酸‑羟基乙酸溶液上，将阿霉素包埋于上述体系，通过二次乳化‑溶剂挥发法制得包埋有阿霉素的吲哚菁绿‑聚乳酸‑羟基乙酸纳米溶液；之后通过将叶酸壳寡糖与阿霉素‑吲哚菁绿‑聚乳酸‑羟基乙酸纳米溶液反应得到阿霉素‑叶酸壳寡糖‑吲哚菁绿‑聚乳酸‑羟基乙酸纳米溶液；最后将阿霉素‑叶酸壳寡糖‑吲哚菁绿‑聚乳酸‑羟基乙酸挤压进入红细胞膜，即可得到红细胞仿生型纳米粒。

技术领域

本发明涉及制药领域，尤其涉及一种集靶向、光热于一体的红细胞仿生型纳米粒的制备方法。

背景技术

癌症（恶性肿瘤）是严重危害人类健康的难治疾病之一，每年都具有较高的发病率和死亡率。因此，对于肿瘤形成及治疗方法的研究，目前己经成为研究人员的研究重点和热点。聚合物纳米粒子由于其具有优良的生物相容性和降解性、较高的载药量和药物递送效率、良好的循环稳定性等特点，因此，现如今聚合物纳米粒子被广泛应用于药物递送系统。

然而传统的纳米粒容易与蛋白质、脂质或其他生物分子粘附结合形成“蛋白质环”从而影响它在体内的行为，若与血清蛋白结合则会引起吞噬细胞的识别和吞噬，导致纳米粒在血液中被快速清除，不但减弱其抗肿瘤效果，有些纳米材料还具有潜在细胞或基因毒性。红细胞膜作为新型纳米递药载体具有独特的优势，具有安全，生物兼容性高，体内可降解等特点，最重要的是红细胞膜上含有CD47蛋白，此蛋白与信号调节蛋白-α（SIRP-α）受体作用可避免巨噬细胞的吞噬，基于这一点我们可将其应用于抗肿瘤纳米递药系统的研究。用红细胞膜包裹抗肿瘤纳米粒制作成为红细胞仿生型纳米粒，因为红细胞膜的独特优势红细胞仿生型纳米粒在体内可逃脱免疫系统的监视，避免被肝脾网状内皮系统清除，达到体内长循环效果，进而可增加纳米粒在肿瘤组织部位的蓄积，增强纳米粒抗肿瘤效果。可以进一步保护机体正常组织免受抗肿瘤药物的损伤。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种集靶向、光热于一体的红细胞仿生型纳米粒的制备方法。本发明首先提取得到红细胞膜，然后将吲哚菁绿负载在聚乳酸-羟基乙酸溶液上，将阿霉素包埋于上述体系，通过二次乳化-溶剂挥发法制得包埋有阿霉素的吲哚菁绿-聚乳酸-羟基乙酸纳米溶液；之后通过将叶酸壳寡糖与阿霉素-吲哚菁绿-聚乳酸-羟基乙酸纳米溶液反应得到阿霉素-叶酸壳寡糖-吲哚菁绿-聚乳酸-羟基乙酸纳米溶液；最后将阿霉素-叶酸壳寡糖-吲哚菁绿-聚乳酸-羟基乙酸挤压进入红细胞膜，即可得到红细胞仿生型纳米粒。

本发明的具体技术方案为：一种集靶向、光热于一体的红细胞仿生型纳米粒的制备方法，包括以下步骤：

1)取6~8周大小的ICR小鼠数只，使用毛细管进行眼球取血并在血中加入肝素抗凝，得到的全血在1-5℃，1500-2500 r/min下离心8-12 min后去除上层的血清和其他血细胞层，得到的红细胞沉淀用冷处理后的1×PBS洗涤3~5次，备用。

在步骤1）中，加入肝素可以加强抗凝血酶灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等，从而阻止血液凝固；采用1×PBS洗涤红细胞沉淀作用在于调整适宜的pH缓冲，保证生物活性物质保持其最完整的特性。

2）向步骤1）得到的红细胞沉淀中加入相当于红细胞沉淀55-65倍体积的冷处理后的0.25×PBS低渗2~3 h，接着在9000-11000 r/min下离心15~20 min，弃去上层液体，下层淡粉色的沉淀即为红细胞膜，再用0.25×PBS反复洗涤3~5次使得提取的红细胞膜更为纯净，备用。

在步骤2）中，采用0.25×PBS洗涤红细胞膜作用在于调整适宜的pH缓冲，保证生物活性物质保持其最完整的特性。