[发明专利]TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法

权利要求书

1.一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：该接种牡丹花器官的方法包括以下步骤：

1)将病毒载体TRV1以及TRV2或者将病毒载体TRV1以及插入有目的基因的重组TRV2分别转化农杆菌，将转化得到的含有TRV1的阳性农杆菌与含有TRV2或重组TRV2的阳性农杆菌经培养后于侵染缓冲液中混合，得混合菌液；

2)经过步骤1)后，用带针头的注射器吸取混合菌液，然后将针头于发育中的牡丹花器官处插入牡丹植株内部并进行注射接种，直至该牡丹花器官表面有液体渗出时停止注射；

3)注射结束后采用以下条件对牡丹植株进行培养：温度为21～25℃，湿度为60～70％，光照强度为1800～2000Lx。

2.根据权利要求1所述一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：所述接种牡丹花器官的方法还包括以下步骤：在牡丹植株培养过程中对牡丹花器官进行表型观测，并采样、提取RNA后用半定量的方法检测花器官各结构的TRV病毒载体的积累情况。

3.根据权利要求1所述一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：所述转化采用冻融法。

4.根据权利要求1所述一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：所述侵染缓冲液包括以下组分：10mM 2-吗啉乙磺酸、100μM乙酰丁香酮及10mM MgCl₂。

5.根据权利要求1所述一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：将对应阳性农杆菌培养至OD600值为0.6～0.8后，经侵染缓冲液重悬并调节OD600为1～1.5，然后按照体积比为1:1进行混合。

6.根据权利要求1所述一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：所述花器官在接种时的发育阶段处于显蕾期至圆桃期之间。

7.根据权利要求1所述一种TRV载体介导的病毒诱导基因沉默系统接种牡丹花器官的方法，其特征在于：所述针头的插入位置具体为萼片基部。